MIKROBIOLOGI

i
KATA PENGANTAR
Kurikulum  2013  dirancang  untuk  memperkuat  kompetensi  siswa  dari  sisi  sikap,
pengetahuan dan keterampilan secara utuh. Keutuhan tersebut menjadi dasar dalam
perumusan  kompetensi  dasar  tiap  mata  pelajaran  mencakup  kompetensi  dasar
kelompok  sikap,  kompetensi  dasar  kelompok  pengetahuan,  dan  kompetensi  dasar
kelompok  keterampilan.  Semua  mata  pelajaran  dirancang  mengikuti  rumusan
tersebut.
Pembelajaran kelas X dan XI jenjang Pendidikan Menengah Kejuruhan yang disajikan
dalam buku ini  juga  tunduk pada  ketentuan tersebut. Buku siswa ini diberisi  materi
pembelajaran  yang  membekali  peserta  didik  dengan  pengetahuan,  keterampilan
dalam menyajikan pengetahuan yang dikuasai secara kongkrit dan abstrak, dan sikap
sebagai  makhluk  yang  mensyukuri  anugerah  alam  semesta  yang  dikaruniakan
kepadanya melalui pemanfaatan yang bertanggung jawab.
Buku  ini  menjabarkan  usaha  minimal  yang  harus  dilakukan   siswa  untuk  mencapai
kompetensi  yang  diharuskan.  Sesuai  dengan  pendekatan  yang  digunakan  dalam
kurikulum  2013,  siswa  diberanikan  untuk  mencari  dari  sumber  belajar  lain  yang
tersedia  dan  terbentang  luas  di  sekitarnya.  Peran  guru  sangat  penting  untuk
meningkatkan   dan  menyesuaikan  daya  serp  siswa  dengan  ketersediaan  kegiatan
buku ini. Guru dapat memperkayanya dengan kreasi dalam bentuk kegiatan-kegiatan
lain yang sesuai dan relevan yang bersumber dari lingkungan sosial dan alam.
Buku  ini  sangat  terbuka  dan  terus  dilakukan  perbaikan  dan  penyempurnaan.  Untuk
itu,  kami  mengundang  para  pembaca  memberikan  kritik,  saran,  dan  masukan  untuk
perbaikan dan penyempurnaan. Atas kontribusi tersebut, kami ucapkan terima kasih.
Mudah-mudahan  kita  dapat  memberikan  yang  terbaik  bagi  kemajuan  dunia
pendidikan dalam rangka mempersiapkan generasi seratus tahun Indonesia Merdeka
(2045).
ii
DAFTAR ISI
KATA PENGANTAR .....................................................................................................................................i
DAFTAR ISI  ....................................................................................................................................................  ii
DAFTAR GAMBAR  .......................................................................................................................................v
DAFTAR TABEL ........................................................................................................................................vii
PETA KEDUDUKAN BAHAN AJAR  ....................................................................................................viii
GLOSARIUM ..................................................................................................................................................x
I. PENDAHULUAN  .......................................................................................................................................  1
A.  Deskripsi  ................................................................................................................................................  1
B.  Ruang Lingkup Materi  ......................................................................................................................  2
C.  Prasyarat  ................................................................................................................................................  2
D.  Petunjuk Penggunaan Buku Teks Bahan Ajar Siswa  ............................................................  2
E.  Tujuan AkhirPembelajaran  ...........................................................................................................  4
F.  Kompetensi Inti dan Kompetensi Dasar  ....................................................................................  4
G.  Cek Kemampuan Awal  ......................................................................................................................  5
II. PEMBELAJARAN  .....................................................................................................................................  8
Kegiatan Pembelajaran 1. Pemeriksaan Kualitas Air dan Makanan Dengan Metode TPC
(Total Plate Count)......................................................................................................................................  8
A.  Deskripsi  ................................................................................................................................................  8
B.  Kegiatan Belajar  ..................................................................................................................................  8
1.  Tujuan Pembelajaran  ...............................................................................................................  8
2.  Uraian Materi  ...............................................................................................................................  9
3.  Refleksi  ........................................................................................................................................  22
4.  Tugas  ............................................................................................................................................  23
5.  Latihan Pembelajaran  ...........................................................................................................  27
C.  Penilaian  .............................................................................................................................................  28
1.  Penilaian Sikap  .........................................................................................................................  28
Diunduh dari BSE.Mahoni.com
iii
2.  Pengetahuan  .............................................................................................................................  36
3.  Penampilan  ................................................................................................................................  37
Kegiatan Belajar 2. Penentuan Jumlah Koloni Kapang  ..............................................................  39
A.  Deskripsi  .............................................................................................................................................  39
B.  Kegiatan Belajar  ...............................................................................................................................  39
1.  Tujuan Pembelajaran  ............................................................................................................  39
2.  Uraian Materi  ............................................................................................................................  39
3.  Refleksi  ........................................................................................................................................  51
4.  Tugas  ............................................................................................................................................  52
5.  Latihan Pembelajaran  ...........................................................................................................  56
C.  Penilaian  .............................................................................................................................................  57
1.  Penilaian Sikap  .........................................................................................................................  57
2.  Pengetahuan  .............................................................................................................................  65
3.  Penampilan  ................................................................................................................................  65
Kegiatan Pembelajaran 3. Identifikasi Bakteri E. Coli dengan Metode IMVIC  ................  67
A.  Deskripsi  .............................................................................................................................................  67
B.  Kegiatan Belajar  ...............................................................................................................................  67
1.  Tujuan Pembelajaran  ............................................................................................................  67
2.  Uraian Materi  ............................................................................................................................  67
3.  Tugas  ............................................................................................................................................  94
4.  Refleksi  ........................................................................................................................................  99
C.  Penilaian  ...........................................................................................................................................100
1.  Penilaian Sikap  .......................................................................................................................100
2.  Pengetahuan  ...........................................................................................................................108
3.  Penampilan  ..............................................................................................................................108
Kegiatan pembelajaran 4. Pemeriksaan Salmonella padaBahan Pangan  ........................110
A.  Deskripsi  ...........................................................................................................................................110
B.  Kegiatan Belajar  .............................................................................................................................110
1.  Tujuan Pembelajaran  ..........................................................................................................110
2.  Uraian Materi  ..........................................................................................................................110
iv
3.  Tugas  ..........................................................................................................................................129
4.  Refleksi  ......................................................................................................................................130
5.  Latihan Pembelajaran  .........................................................................................................131
C.  Penilaian  ...........................................................................................................................................132
1.  Penilaian Sikap  .......................................................................................................................132
2. Pengetahuan  ...............................................................................................................................140
3. Penampilan  .................................................................................................................................141
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................................................143
v
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Teknik pengenceran Sampel  ........................................................................................  11
Gambar 2. Proses inokulasi bakteri, penuangan media dan penghomogenan larutan  14
Gambar 3. Pertumbuhan bakteri pada metode Spread plate dan Pour plate  ..................  14
Gambar 4. Goresan T kuadran 3 .......................................................................................................  16
Gambar 5. Goresan T kuadran 4  ......................................................................................................  16
Gambar 6. Goresan Sinambung  .........................................................................................................  17
Gambar 7. Morfologi Kapang pada Media PDA  ...........................................................................  40
Gambar 8. Tempe dan Oncom  ............................................................................................................  41
Gambar 9. Morfologi Rhizopus  ..........................................................................................................  43
Gambar 10. Aspergillus  ........................................................................................................................  44
Gambar 11. Prosedur isolasi kapang  ...............................................................................................  47
Gambar 12. E coli dalam media EMB Agar  ....................................................................................  69
Gambar 13. Lactose broth positif coliform (kiri) dan Lactose broth negative coliform
(kanan)  .........................................................................................................................................................  70
Gambar 14. MacConkey Agar dan MacConkey Agar yang ditumbuhi bakteri.................  72
Gambar 15. MacConkey broth (ungu) dan MacConkey broth yang ditumbuhi
bakteri  ..........................................................................................................................................................  73
Gambar 16.
http://85.238.144.18/analytics/Micro_Manual/TEDISdata/prods/1_05454_0500_500
0.html  ............................................................................................................................................................  74
Gambar 17. Seri pengenceran  ............................................................................................................  75
Gambar 18. Lactose Broth hasil negative (kiri) dan Lactose Broth hasil positif ditandai
dengan adanya perubahan warna media dan adanya gas dalam tabung durham
(kanan)  .........................................................................................................................................................  76
Gambar 19. Hasil uji negative (kiri) dan hasil uji positif yang ditandai adanya
gelembung gas pada tabung durham (kanan)  ..............................................................................  77
Gambar 20. Media EMBA yang positif e coli  .................................................................................  77
vi
Gambar 21. Tahapan Uji Coliform dengan seri pengenceran 3 tabung  .............................  78
Gambar 22. Metode MPN seri pengenceran 5 tabung  ..............................................................  80
Gambar 23. Reaksi Uji Indol  ...............................................................................................................  86
Gambar 24. Reaksi Indol pada Uji Imvic  ........................................................................................  87
Gambar 25. Reaksi kimia uji Metil Red  ...........................................................................................  88
Gambar 26. Uji MR  ..................................................................................................................................  89
Gambar 27. Reaksi Uji VP  ....................................................................................................................  90
Gambar 28. Uji VP pada IMVIC Test.................................................................................................  91
Gambar 29. Reaksi Kimia Uji Sitrat  ..................................................................................................  92
Gambar 30. Uji sitrat negatif  ...............................................................................................................  93
Gambar 31.  Salmonella typhii dalam media Bismuth Sulfit Agar  .......................................112
Gambar 32. Salmonella typhii dalam media Brillian Green Agar  ........................................113
Gambar 33. Media Xylose-Lysine-Desoxycholate Agar (kiri) dan Media Xylose-LysineDesoxycholate Agar yang ditumbuhi Salmonella  .......................................................................114
Gambar 34. Salmonella Typhimurium dalam Media TSIA  .....................................................115
Gambar 35. Media Hektoen Enteric Agar (kiri) dan Salmonella dalam media Hektoen
Enteric Agar  ..............................................................................................................................................116
Gambar 36. Metoda ISO 6579:2002 untuk Deteksi Salmonella  ..........................................117
Gambar 37. XLD agar (kiri) dan Koloni Salmonella dalam XLD agar (kanan)  ...............118
Gambar 38. Koloni Salmonella pada Rambach agar (kiri) dan koloni e coli pada
rambach agar (kanan)  ..........................................................................................................................119
Gambar 39. Sebelum dan Sesudah Proses Pra-Pengkayaan  ................................................120
Gambar 40. Isolasi bakteri dari media pra-pengkayaan ke media pengkayaan  ..........121
Gambar 41. Koloni positif pada media selektif  HE (atas), BSA (kiri), dan XLD (kanan)
(gambar kanan) dan koloni negatif pada media yang sama (gambar kiri)  .....................122
vii
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Daftar MPN coliform (menggunakan 3 tabung)  .........................................................  81
Tabel 2. Daftar MPN Coliform menggunakan 5 tabung ............................................................  82
Tabel 3. Sifat sifat bakteri Coliform dengan uji IMVIC ..............................................................  93
viii
PETA KEDUDUKAN BAHAN AJAR
Keterangan :
TDPLK  : Teknik Dasar Pekerjaan Laboratorium Kimia
KIM OR  : Kimia Organik
AKD   : Analisis Kimia Dasar
ATG  : Analisis Titrimetri dan Gravimetri
MAN LAB  :Manajemen Laboratorium
Peta Kompetensi  yang  ada  didalam buku teks bahan ajar siswa semester 2, apabila
dilihat  dari  mata  pelajaran  Mikrobiologi   pada  Program  Studi  Kimia  Analis  adalah
seperti pada gambar berikut:
ix
Keterangan :
Mata  Pelajaran  Mikrobiologi  mencakup  sepuluh  kompetensi  dasar,  yaitu,  Ciri-ciri
KoloniSel  dan  Bakteri,  Identifikasi  Jamur,  Bakteri,  dan  Yeast,  Pembuatan  Media,
Teknik  Sterilisasi  dan  Uji  Sterilitas,  Teknik  Isolasi  dan  Inokulasi,  Kondisi  Optimum
Pertumbuhan  Mikroba,  Pemeriksaan  Kualitas Air  dan  Makanan  dengan  Metode  TPC,
Perhitungan Koloni Kapang, Identifikasi bakteri  E.coli, dan Pengujian  Salmonellapada
Makanan
Pembelajaran  yang  paling  awal  diberikan  adalah  Ciri-ciri  Koloni  Sel  dan  Bakteri,
Identifikasi  Jamur,  Bakteri  dan  Yeast,  Pembuatan  Media,  Teknik  Sterilisasi  dan  Uji
Sterilitas, Teknik Isolasi dan Inokulasi, serta Kondisi Optimum Pertumbuhan Mikroba
sebagai  prasyarat  dalam  mempelajari  Pembelajaran  Pemeriksaan  Kualitas  Air  dan
Makanan dengan Metode  TPC, Perhitungan Koloni Kapang, Identifikasi bakteri E. coli,
dan Pengujian Salmonellapada Makanan
x
GLOSARIUM
Agen adalah perantara
Aerobikadalah membutuhkan oksigen selama masa hidupnya
Aflatoksin adalah metabolic sekunder dari berbagai fungi/kapang
Algaadalah ganggang
Aman  untuk  dikonsumsi adalah  pangan  tersebut  tidak  mengandung  bahan-bahan
yang  dapat  membahayakan  kesehatan  atau  keselamatan  manusia  misalnya
bahan yang dapat menimbulkan penyakit atau keracunan.
Anaerobikadalah tidak membutuhkan oksigen selama masa hidupnya
Analisis adalah  prosedur  mengukur,  menentukan,  atau  membandingkan  suatu  sifat
atau  parameter  dalam  bahan  atau  produk  dengan  menggunakan  metode  dan
peralatan yang biasanya dilakukandi laboratorium
Asam aminoadalah penyusun protein dan peptide
Bakteri adalah makhluk hidup sederhana bersel tunggal
Bahan Panganadalah bahan baku dan bahan tambahan yang akan digunakan sebagai
bahan masukan dalam pengolahan suatu produk pangan
Coliform adalah  kelompok  bakteri  yang  digunakan  sebagai  indikator  adanya  polusi
dan kondisi sanitasi yang tidak baik
E.coliadalah bakteri gram negatif yang berbentuk batang pendek
Eukarion adalah sel yang memiliki inti yang jelas sel
xi
Enzim  adalah  biomolekul  berupa  protein  yang  berfungsi  sebagai  katalis  (senyawa
yang mempercepat proses reaksi tanpa habis bereaksi)
Fermentasi adalah  proses  produksi  energi  dalam  sel  dalam  keadaan  anaerobik
(tanpa oksigen).
Flagelaadalah alat gerak pada bakteri ( bersel satu) yang berbentuk cambuk
Genusadalah  salah  satu  bentuk  pengelompokan  dalam  klasifikasi  makhluk  hidup
yang lebih rendah dari familia
Glukosa  adalah  salah  satu  karbohidrat  terpenting  yang  digunakan  sebagai  sumber
tenaga bagi hewan dan tumbuhan
Heterotof adalah organisme yang tidak mampu membuat makanannya sendiri
Hifa  adalah  elemen  terkecil  dari  jamur,  yaitu  berupa  benang-benang  filamen  yang
terdiri dari sel-sel
Higiene  adalah segala usaha untuk memelihara dan mempertinggi derajat kesehatan
(d) Sanitasi adalah upaya pencegahan terhadap kemungkinan bertumbuh dan
berkembang biaknya jasad renik pembusuk dan patogen dalam peralatan dan
bangunan yang dapat merusak dan membahayakan
Inkubasiadalah Pengkondisian mikroba untuk tumbuh dan berkembang biak sesuai
dengan suhu dan waktu yang dibutuhkan
Inokulasi  adalah  suatu pekerjaan memindahkan mikroorganisme dari medium lama
ke medium yang baru
Isolasi  bakteriadalah   suatu  cara  untuk  memisahkan  atau  memindahkan  mikroba
tertentu dari lingkungannya sehingga diperoleh kultur murni bakteri
xii
Keamanan  Pangan  adalah  kondisi  dan  upaya  yang  diperlukan  untuk  mencegah
pangan  dari  kemungkinan  cemaran  biologis,  kimia  dan  fisik  yang  dapat
mengganggu, merugikan dan membahayakan kesehatan manusia.
Khamiradalah mikroorganisme eukariot yang diklasifikasikan dalam kingdom Fungi
Kitin adalah  komponen  utama  dari  dinding  sel  jamur,  exoskeleton  (kerangka  luar)
dari arthropoda
Kolumelaadalah bagian dari jamur yang berbentuk kolom-kolom
Konidioforaadalah spora aseksual pada jamur
Koloni  adalah Pertumbuhan mikroorganisme pada medium biakan padat yang secara
makroskopis kasatmata ( dapat dilihat dengan mata langsung)
Kontaminasiadalah Masuknya organisme yang tidak dikehendaki kedalam beberapa
bahan atau benda
Layak untuk dikonsumsiadalah pangan yang diproduksi dalam kondisi normal dan
tidak  mengalami  kerusakan,  berbau  busuk,  menjijikkan,  kotor,  tercemar  atau
terurai, sehingga dapat diterima oleh masyarakat pada umumnya.
Media  adalah  Nutrisi  dalam  bentuk  padat  atau  cair  untuk  tempat  pertumbuhan
mikroba  adalah  kelompok  organisme  yang  berukuran  kecil  dan  hanya  dapat
dilihat di mikroskop
Media agaradalah Media padat yang digunakan untuk pertumbuhan mikroba
Media  selektif  adalah  Media  yang  mengandung  bahan-bahan  selektif  untuk
menghambat pertumbuhan bakteri selain bakteri yang dianalisa
Miselium  adalah  bagian  Jamur  Multiseluler  yang  dibentuk  oleh  kumpulan  beberapa
Hifa
xiii
Parasit adalah organisme yang mengganggu organisme lain yang ditumpanginya
Pangan adalahsegala  sesuatu  yang  berasal  dari  sumber  hayati  dan  air,  baik  yang
diolah  maupun  yang  tidak  diolah,  yang  diperuntukkan  sebagai  makanan  atau
minuman  bagi  konsumsi  manusia,  termasuk  bahan  tambahan  pangan,  bahan
baku  pangan  dan  bahan  lain  yang  digunakan  dalam  proses  penyiapan,
pengolahan, dan/atau pembuatan makanan atau minuman.
Penyimpanan  pangan adalah  proses,  cara  dan  /  atau  kegiatan  menyimpan  pangan
baik di sarana produksi maupun distribusi.
Peredaran  pangan adalahsetiap  kegiatan  atau  serangkaian  kegiatan  dalam  rangk a
penyaluran  pangan  kepada  masyarakat,  baik  untuk  diperdagangkan  maupun
tidak.
Ragi adalah  agensia  pengembangyang  mengandung  karbonat  atau  bikarbonat  dan
umumnya bersifat asam
Reagenadalah pereaksi kimia
Rhizoid  adalah  hifa  vegetatif  mirip  akar  dari  tumbuhan  yang  dapat  bercabang-
cabang seperti jari-jari pada tangan
Sanitasiadalah Mengurangi jumlah mikroba dalam suatu bahan atau pada alat untuk
meningkatkan keamanannya
Saprofit adalah Suatu organisme yang hidup pada bahan organik mati
Simbiosisadalah interaksi antara dua organisme yang saling menumpang satu sama
lain
Serotipe adalah  bentuk  suatu  zat  yang  dibedakan  dengan  beberapa  jenis  tes
laboratorium
xiv
Substrat  adalah  molekul  organik  yang  telah  berada  dalam  kondisi  siap/segera
bereaksi
Sterilisasi  adalah  proses  pemusnahan  semua  mikroorganisme  termasuk  spora
bakteri yang sangat resisten
Strain adalah  Kultur  murni  dari  suatu  mikroorganisme  yang  terdiri  dari  isolate  sel
yang sama
Stolon adalah batang yang tumbuh mendatar di permukaan tanah
Sporangiforaadalah cabang miselium yang mengandung sporangium
Organoleptik adalah sifat bahan makanan yang dinilai dengan menggunakan indra
Yeast adalah jamur
1
I. PENDAHULUAN
A.  Deskripsi
Mata  Pelajaran  Mikrobiologi  merupakan  sebuah  cabang  ilmu  dari  biologi  yang
mempelajari  tentang  mikroorganisme.Objek  kajian  mikrobiologi  adalah  semua
makhluk hidup yang hanya bisa dilihat dengan mikroskop.
Mata pelajaran Mikrobiologi bertujuan untuk:
  Menambah keimanan peserta didik dengan menyadari hubungan keteraturan,
keindahan alam, dan kompleksitas alam dalam jagad raya terhadap kebesaran
Tuhan yang menciptakannya;
  Menyadari  kebesaran  Tuhan  yang  menciptakan  bumi  dan  seisinya  yang
memungkinkanbagi makhluk hidup untuk tumbuh dan berkembang;
  Menunjukkan  perilaku  ilmiah  (memiliki  rasa  ingin  tahu;  objektif;  jujur;  teliti;
cermat;  tekun; ulet;  hati-hati;  bertanggung  jawab;  terbuka;  kritis;   kreatif;
inovatif  dan  peduli  lingkungan)  dalam  aktivitas  sehari-hari  sebagai  wujud
implementasi sikap ilmiah dalam melakukan percobaan dan berdiskusi;
  Menghargai  kerja  individu  dan  kelompok  dalam  aktivitas  sehari-hari  sebagai
wujud  implementasi  melaksanakan  percobaan  dan  melaporkan  hasil
percobaan;
  Memupuk  sikap  ilmiah  yaitu  jujur,   obyektif,  terbuka,  ulet,  kritis  dan  dapat
bekerjasama dengan orang lain;
  Mengembangkan  pengalaman  menggunakan  metode  ilmiah  untuk
merumuskan  masalah,  mengajukan dan menguji hipotesis  melalui percobaan,
merancang dan merakit instrumen percobaan, mengumpulkan, mengolah, dan
menafsirkan data, serta mengkomunikasikan hasil percobaan secara lisan dan
tertulis;
  Mengembangkan  kemampuan  menalar  dalam  berpikir  analisis  induktif  dan
deduktif dengan  menggunakan  konsep  dan  prinsip  keamanan  pangan  untuk
2
menjelaskan  berbagai  peristiwa  alam  dan  menyelesaian  masalah  baik  secara
kualitatif maupun kuantitatif;
  Menguasai  konsep  dan  prinsip  keamanan  pangan  serta  mempunyai
keterampilan  mengembangkan  pengetahuan,  dan  sikap  percaya  diri  sebagai
bekal kesempatan untuk bekerja serta dan mengembangkan ilmu pengetahuan
dan teknologi.
B.  Ruang Lingkup Materi
  Pemeriksaan makanan dan minuman dengan metode TPC
  Pemeriksaan dan perhitungan total koloni dan kapang
  Identifikasi bakteri E.colidengan metode IMViC
  Identifikasi bakteri Salmonellapada makanan
C.  Prasyarat
Untuk  mempelajari  mikrobiologi  pada  buku  teks  bahan  ajar  siswa  semester  2
diharapkan siswa telah memahami semua pembelajaran pada buku mikrobiologi
semester  1  yang  mencakup  Ciri-ciri  Koloni,  Sel  dan  Bakteri,  Identifikasi  Jamur,
Bakteri, dan  Yeast, Pembuatan Media, Teknik Sterilisasi dan Uji Sterilitas, Teknik
Isolasi dan Inokulasi, serta Kondisi Optimum Pertumbuhan Mikroba
D.  Petunjuk Penggunaan Buku Teks Bahan Ajar Siswa
1.  Buku teks bahan ajar siswa mikrobiologi terdiri dari 2 buku, yaitu mikrobiologi
semester 1 dan mikrobiologi semester 2
2.  Buku  teks  bahan  ajar  semester  2  terdiri  dari  kompetensi  dasar  pemeriksaan
makanan dan kualitas air dengan metode TPC, Perhitungan Total koloni kapang,
Identifikasi  E  coli dengan  metode  IMViC  dan  TPCserta  Identifikasi  Salmonella
pada bahan pangan
3.  Sebelum memulai belajar, isilah ceklist kemampuan awal
3
4.  Mulailah belajar dengan kompetensi dasar yang pertama dan seterusnya
5.  Apabila  telah  selesai  mempelajari  uraian  atau  lembar  informasi,  lanjutkan
dengan lembar kerja/tugas
6.  Apabila telah selesai mempelajari lembar informasi dan dan lembar kerja ,pada
setiap kompetentensi dasar (KD), cek kemampuan anda dengan mengerjakan
lembar penilaian dalam bentuk latihan, dan isilah refleksi
7.  Setelah selesai belajar semua kompetensi dasar dalam satu semester kerjakan
lembar penilaian akhir semester.
8.  Apabila  anda  merasa  belum  berhasil  dan  atau  hasil  penilaian  akhir  semester
masih kurang dari 70, pelajari kembali materi yang merasa masih kurang
Didalam  proses  belajar  mengajar  siswa  harus  melewati  tahap-tahap  pembelajar
yaitu :
1.  Kegiatan  mengamati,  yaitu  siswa  dapat  mengamati  segala  sesuatu  yang
berhubungan  mikrobiologi,  baik  yang  ada  di  buku  ini,  sekolah,  industri  atau
sumber belajar lainnya.
2.  Kegiatan  menanya,  yaitu  siswa  diharapkan  melakukan  kegiatan  bertanya
mengenai  kenyataan  yang  ada  dibuku  maupun  dilapangan,  dengan  cara
bertanya  langsung  terhadap  guru,  teman  sendiri,  wawancara  pihak  industri
maupun dengan cara diskusi kelompok.
3.  Kegiatan  mengumpulkan  data  atau  informasi,  yaitu  siswa  diharapkan  dapat
mengumpulkan data atau bahan tentang mikrobiologi dengan cara ekperimen
atau  praktek,  membaca,  melalui  internet,  wawancara  dengan  pihak  yang
kompeten.
4.  Kegiatan  mengasosiasi,  yaitu  siswa  diharapkan  dapat  menghubungkan  dari
hasil data/informasi tentang hasil pengamatan, membaca, ekperimen/praktek
menjadi satu kesimpulan hasil belajar
5.  Kegiatan  mengkomunikasikan,  yaitu  siswa  dapat  mengkomunikasikan  hasil
data/informasi kepada orang lain, dapat melalui lisan atau tulisan.
4
E.  Tujuan Akhir Pembelajaran
1.  Setelah mempelajari buku teks bahan ajar siswa ini peserta didik mampu :
2.  Memahami  konsep  dan  prinsip  cara  melakukan  kualitas  air  dan  makanan
dengan metode TPC
3.  Melakukan pemeriksaan kualitas air dan makanan dengan metoda TPC
4.  Menerapkan konsep dan prinsip cara menentukan jumlah koloni kapang
5.  Melaksanakan pengujian total kapang dalam suatu sampel
6.  Menerapkan  konsep  dan  prinsip  cara  teknik  identifikasi  bakteri  E  coli
menggunakan metode IMVIC
7.  Melakukan identifikasi bakteri E coli menggunakan metode IMVIC
8.  Menerapkan konsep dan prinsip cara pelaporan hasil pemeriksaan Salmonella
bahan pangan
9.  Melakukan pemeriksaan Salmonella pada bahan pangan
F.  Kompetensi Inti dan Kompetensi Dasar
Kompetensi  Inti  dan  Kompetensi  dasar  pada  mata  pelajaran  Mikrobiologi  pada
semester dua sebagai berikut:
KOMPETENSI INTI  KOMPETENSI DASAR
1.  Menghayati dan mengamalkan
ajaran agama yang dianutnya
1.1  Meyakini anugerah Tuhan
melalui pembelajaran
mikrobiologi sebagai amanat
untuk kemaslahatan umat
manusia.
2.  Menghayati perilaku (jujur,
disiplin, tanggungjawab, peduli,
santun, ramah lingkungan,
gotong royong, kerjasama, cinta
damai, responsif dan pro-aktif)
dan menunjukan sikap sebagai
bagian dari solusi atas berbagai
permasalahan bangsa dalam
berinteraksi secara efektif
dengan lingkungan sosial dan
2.1  Menghayati sikap cermat, teliti
dan tanggungjawab sebagai
hasil dari pembelajaran
2.2  Menghayati pentingnya
kerjasama sebagai hasil
pembelajaran praktik
2.3  Menghayati pentingnya
kepedulian terhadap kebersihan
lingkungan laboratorium
mikrobiologi sebagai hasil dari
5
KOMPETENSI INTI  KOMPETENSI DASAR
alam serta dalam menempatkan
diri sebagai cerminan bangsa
dalam pergaulan dunia.
pembelajaran praktik
3.  Memahami, menganalisis serta
menerapkan pengetahuan
faktual, konseptual, prosedural
dalam ilmu pengetahuan,
teknologi, seni, budaya, dan
humaniora dengan wawasan
kemanusiaan, kebangsaan,
kenegaraan, dan peradaban
terkait penyebab fenomena dan
kejadian dalam bidang kerja
yang spesifik untuk
memecahkan masalah
3.1  Menerapkan konsep dan prinsip
cara melakukan pemeriksaan
kualitas air dan makanan metoda
TPC
3.2  Menerapkan konsep dan prinsip
cara menentuan jumlah koloni
kapang
3.3  Menerapkan konsep dan prinsip
cara teknik  identifikasi bakteri E.
Colimenggunakan metode IMViC
(red, Voges-Prokauer, Citrate
Indole, Methil)
3.4  Menerapkan konsep dan prinsip
cara pelaporan hasil pemeriksaan
Salmonella bahan pangan
4.  Mengolah, menalar, dan menyaji
dalam ranah konkret dan ranah
abstrak terkait dengan
pengembangan dari yang
dipelajarinya di sekolah secara
mandiri, dan mampu
melaksanakan tugas spesifik di
bawah pengawasan langsung.
4.1  Melakukan pemeriksaan kualitas
air dan makanan dengan metoda
TPC
4.2  Melaksanakan pengujian total
kapang dalam sampel
4.3  Melakukan identifikasi bakteri E.
Colimenggunakan metode IMVIC
(Indole, Methil red, VogesProkauer Citrate)
4.4  Melakukan pemeriksaan
Salmonella pada bahan pangan
G.  Cek Kemampuan Awal
Jawablah pertanyaan berikut dengan memberi tanda “√” pada kolom “sudah” atau
“belum”.
No  Pertanyaan  Sudah  Belum
1.    Apakah  anda sudah memahami konsep dan prinsip
pemeriksaan  kualitas  air  dan  makanan  dengan
metode TPC
2.    Apakah  anda  sudah  bisa  melakukan  pemeriksaan
kualitas air dan makanan secara mikrobiologis?
6
3.    Apakah  anda  sudah  memahami  tentang  teknik
menghitung koloni mikroba dengan metode TPC
4.    Apakah anda sudah mengetahui cara kerja dan cara
perhitungan mikroba dengan teknik TPC
5.    Apakah  anda sudah dapat melakukan pemeriksaan
kualitas air dan makanan dengan teknik TPC
6.    Apakah  anda dapat menyimpulkan dan menyajikan
hasil  dari  pemeriksaan  kualitas  air  dan  makanan
dengan metode TPC
7.    Apakah  anda  mengetahui  konsep  dan  prinsip  cara
perhitungan koloni kapang
8.    Apakah  anda  sudah  dapat  melakukan  pengujian
untuk  menghitung  jumlah  koloni  kapang  dalam
sampel
9.    Apakah  anda  sudah  dapat  menyimpulkan  dan
menyajikan  hasil  pengujian  perhitungan  koloni
kapang
10.    Apakah  anda  dapat  mengetahui  karakteristik
bakteri coliform
11.    Apakah  anda  sudah  mengetahui  cara  perhitungan
mikroba dengan teknik MPN
12.    Apakah  anda  sudah  mengetahui  tentang  berbagai
media yang dapat digunakan untuk isolasi E coli
13.    Apakah anda sudah mengetahui konsep dan prinsip
cara identifikasi bakteri E coli
14.    Apakah  anda  sudah  memahami  cara  identifikasi
bakteri E. coli dengan metode IMViC
15.    Apakah  anda  sudah  dapat  melakukan  identifikasi
bakteri dengan metode IMViC
16.    Apakah  anda  sudah  dapat  menyajikan  hasil
identifikasi bakteri E coli dengan metode IMViC
17.    Apakah anda sudah mengetahui konsep dan prinsip
pemeriksaan Salmonella pada bahan pangan
18.    Apakah  anda  sudah  mengetahui  media  apa  saja
yang  digunakan  dalam  pemeriksaan  Salmonella
pada bahan pangan
19.    Apakah  anda  sudah  mengetahui  prosedur  kerja
cara pemeriksaan Salmonella pada bahan pangan
20.    Apakah anda sudah dapat melakukan pemeriksaan
Salmonella pada bahan pangan
21.    Apakah  anda  sudah  dapat  melaporkan  hasil
pemeriksaan Salmonella pada bahan pangan
7
Keterangan :
1.  Apabila  jawaban  “sudah”  minimal  18  item  (lebih  dari  70%),  maka  anda
sudah bisa langsung mengerjakan evaluasi.
2.  Apabila  jawaban  “sudah”  kurang  dari  18  (kurang  dari  70%),  maka  anda
harus mempelajari buku teks terlebih dahulu
8
II. PEMBELAJARAN
Kegiatan  Pembelajaran  1.  Pemeriksaan  Kualitas  Air  dan  Makanan  Dengan
Metode TPC (Total Plate Count)
A.  Deskripsi
Pemeriksaan  kualitas  air  dan  makanan  dilakukan  untuk  mengetahui  layak  atau
tidaknya makanan atau minuman tersebut kita konsumsi. Hal tersebut bergantung
pada  jumlah  dan  jenis  mikroorganisme  yang  ada  dalam  makanan  atau  minuman
tersebut.Pemeriksaan ini dapatdilakukan dengan metode TPC (Total Plate Count),
yaitu dengan menghitung jumlah mikroba yang terdapat dalam suatu sampel atau
sediaan.  Metode  TPC  juga  sering  disebut  dengan  metode  ALT  (Angka  Lempeng
Total)
B.  Kegiatan Belajar
1.  Tujuan Pembelajaran
Setelah melakukan kegiatan belajar ini, diharapkan siswa dapat :
a)  Mengetahui prinsip dan tujuan penentuan jumlah mikroba dengan TPC
b)  Mengetahui  standar  mutu  produk  berdasarkan  jumlah  mikroba  yang  ada
dalam produk tersebut
c)  Mengetahui  dan  melakukan  cara  penentuan  jumlah  mikroba  dengan
metode  TPC  dimulai  dari  preparasi  sampel,  teknik  pengenceran  sampel,
sampai  dengan  aturan  perhitungan  jumlah  koloni  dan  cara  melaporkan
data jumlah bakteri
9
2.  Uraian Materi
a.  Kualitas Air dan Makanan
Mikroorganisme  atau  mikroba  adalah  organisme  hidup  yang  berukuran
sangat  kecil  dan  hanya  dapat  diamati  dengan  menggunakan  mikroskop.
Mikroorganisme  dapat  berinteraksi  dengan  organisme  lain  dengan  cara
yang  menguntungkan  atau  merugikan.  Interaksi  mikroorganisme  dengan
bahan  pangan  dapat  menyebabkan  perubahan  pada  bahan  pangan
tersebut.Perubahan pada  bahan pangan tersebut dapat berupa  perubahan
menguntungkan  atau  merugikan.  Perubahan  yang  menguntungkan  dapat
kita  lihat  pada  proses  pembuatan  tempe  oleh  jamur,  pembuatan  yoghurt
oleh  Lactobacillus bulgaricus. Sedangkan perubahan yang merugikan dapat
berupa kerusakan atau pembusukan makanan.
Kerusakan bahan pangan dapat berlangsung cepat atau lambat tergantung
dari  jenis  bahan  pangan  atau  makanan  yang  bersangkutan  dan  kondisi
lingkungan  dimana  bahan  pangan  tersebut  diletakkan  (Wijayanti,
2011).Salah satu indikator kerusakan produk pangan atau makanan adalah
bila  jumlah  mikroorganisme  tumbuh  melebihi  batas  yang  telah
ditetapkan.Untuk  mengetahui  sejauh  mana  kerusakan  bahan  pangan
tersebut  dan  untuk  mengetahui  aman  atau  tidaknya  makanan  tersebut
dikonsumsi,  maka  harus  terlebih  dahulu  dilakukan  pemeriksaan
mikrobiologi.Pengujian  mikrobiologi  diantaranya  meliputi  uji  kuantitatif
untuk  menentukan  mutu  dan  daya  tahan  suatu  makanan,  uji  kualitatif
bakteri  patogen  untuk  menentukan  tingkat  keamanannya,  dan  uji  bakteri
indikator  untuk  mengetahui  tingkat  sanitasi  makanan  tersebut  (Fardiaz,
1993).
Pengujian   mikrobiologi   pada   sampel   makanan   akan   selalu   mengacu
kepada  persyaratan   makanan   yang   sudah   ditetapkan.   Parameter   uji
mikrobiologi pada air dan makanan yang dipersyaratkan sesuai Standar
10
Nasional   Indonesia  diantaranya  uji  TPC  (Total  Plate  Count)  atau  ALT
(Angka  Lempeng  Total),   uji  MPN   Coliform  dan  lain-lain.Uji  Total  Plate
Count (TPC)  merupakan  metode  kuantitatif  yang  umumnya  digunakan
untuk menghitung adanya bakteri secara langsung.
b.  Metode Total Plate Count (TPC)
Prinsip  dari  metode  hitungan  cawan  atau  Total  Plate  Count (TPC)  adalah
menumbuhkan  sel  mikroorganisme  yang  masih  hidup  pada  media  agar,
sehingga  mikroorganisme  akan  berkembang  biak  dan  membentuk  koloni
yang dapat dilihat langsung dan dihitung dengan mata tanpa menggunakan
mikroskop.  Metode  ini  merupakan  metode  yang  paling  sensitif  untuk
menentukan  jumlah  mikroorganisme.Dengan  metode  ini,  kita  dapat
menghitung sel yang masih hidup, menentukan jenis mikroba yang tumbuh
dalam  media  tersebut  serta  dapat  mengisolasi  dan  mengidentifikasi  jenis
koloni mikroba tersebut.
Pada  metode  ini,  teknik  pengenceran  merupakan  hal  yang  harus
dikuasai.Sebelum  mikroorganisme  ditumbuhkan  dalam  media,  terlebih
dahulu  dilakukan  pengenceran  sampel  menggunakan  larutan
fisiologis.Tujuan  dari  pengenceran  sampel  yaitu  mengurangi  jumlah
kandungan  mikroba  dalam  sampel  sehingga  nantinya  dapat  diamati  dan
diketahui  jumlah  mikroorganisme  secara  spesifik  sehingga  didapatkan
perhitungan  yang  tepat.Pengenceran  memudahkan  dalam  perhitungan
Dengan bekerja secara kelompok, carilah
informasi persyaratan standar TPC pada
beberapa produk makanan dan
informasi mengenai prosedur analisis
TPC.
11
koloni  (Fardiaz,  1993).  Menurut  Waluyo  (2005),  tahapan  pengenceran
dimulai dari membuat larutan sampel sebanyak 10 ml (campuran 1 ml/1gr
sampel  dengan  9  ml  larutan  fisiologis).  Dari  larutan  tersebut  diambil
sebanyak  1  ml  dan  masukkan  kedalam  9  ml  larutan  fisiologis  sehingga
didapatkan pengenceran 10
-2
. Dari pengenceran 10
-2
diambil lagi 1 ml dan
dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi  berisi  9  ml  larutan  fisiologis  sehingga
didapatkan  pengenceran  10
-3
,  begitu  seterusnya  sampai  mencapai
pengenceran  yang  kita  harapkan.Secara  keseluruhan,  tahap  pengenceran
dijelaskan dalam gambar berikut ini.
Gambar 1. Teknik pengenceran Sampel
Sumber. Pearson, 2006
Setelah  dilakukan  pengenceran,  kemudian  dilakukan  penanaman  pada
media  lempeng  agar.Setelah  diinkubasi,  jumlah  koloni  masing-masing
12
cawan  diamati  dan  dihitung.Koloni  merupakan  sekumpulan
mikroorganisme  yang  memiliki  kesamaan  sifat  seperti  bentuk,  susunan,
permukaan, dan sebagainya. Sifat-sifat yang perlu diperhatikan pada koloni
yang tumbuh di permukaan medium adalah sebagai berikut:
  Besar kecilnya  koloni. Ada koloni yang hanya berupa satu titik, namun
ada pula yangmelebar sampai menutup permukaan medium.
  Bentuk.  Ada  koloni  yang  bulat  dan  memanjang.  Ada  yang  tepinya  rata
dan tidak rata.
  Kenaikan permukaan. Ada koloni yang rata dengan permukaan medium,
ada pula yangtimbul diatas permukaan medium.
  Halus  kasarnya  pemukaan.  Ada  koloni  yang  permukaannya  halus,  ada
yang permukaannya kasar dan tidak rata.
  Wajah  permukaan.  Ada  koloni  yang  permukaannya  mengkilat  da  nada
yang permukaannya suram.
  Warna.  Kebanyakan  koloni  bakteri  berwarna  keputihan  atau
kekuningan.
  Kepekatan.  Ada  koloni  yang  lunak  seperti  lender,  ada  yang  keras  dan
kering.
Selanjutnya  perhitungan  dilakukan  terhadap  cawan  petri  dengan  jumlah
koloni  bakteri  antara  30-300.Perhitungan  Total  Plate  Countdinyatakan
sebagai jumlah koloni bakteri hasil perhitungan dikalikan faktor pengencer.
Keuntungan  dari  metode  TPC  adalah  dapat  mengetahui  jumlah  mikroba
yang  dominan.  Keuntungan  lainnya  dapat  diketahui  adanya  mikroba  jenis
lain yang terdapat dalam contoh.Adapun kelemahan dari metode ini adalah:
  Memungkinkan  terjadinya  koloni  yang  berasal  lebih  dari  satu  sel
mikroba, seperti pada mikroba yang berpasangan, rantai atau kelompok
sel.
13
  Memungkinkan  ini  akan  memperkecil  jumlah  sel  mikroba  yang
sebenarnya. Kemungkinan  adanya  jenis  mikroba  yang  tidak  dapat
tumbuh karena penggunaan jenis media agar, suhu, pH, atau kandungan
oksigen selama masa inkubasi.
  Memungkinkan  ada  jenis  mikroba  tertentu  yang  tumbuh  menyebar  di
seluruh  permukaan  media,sehingga  menghalangi  mikroba  lain.  Hal  ini
akan mengakibatkan mikroba lain tersebut tidak terhitung.
  Penghitungan  dilakukan  pada  media  agar  yang  jumlah  populasi
mikrobanya antara 30  –300 koloni. Bila jumlah populasi kurang dari 30
koloni  akan  menghasilkan  penghitungan  yang  kurang  teliti  secara
statistik, namun bila lebih dari 300 koloni akan menghasilkan hal yang
sama karena terjadi persaingan diantara koloni.
  Penghitungan populasi mikroba dapat dilakukan setelah masa inkubasi
yang umumnya membutuhkan waktu 24 jam atau lebih.
Uji Total Plate Countmenggunakan media padat dengan hasil akhir berupa
koloni  yang  dapat  diamati  secara  visual  dan  dihitung.   Sebelum  diuji  di
media  padat,  sampel  terlebih  dahulu  harus  diencerkan.  Pengenceran
sampel  dilakukan  terhadap  sediaan  yang  akan  didentifikasi  kemudian
ditanam  pada  media  lempeng  agar.  Jumlah  koloni  bakteri  yang  tumbuh
pada  lempeng  agar  dihitung  setelah  inkubasi  pada  suhu  dan  waktu  yang
sesuai.Perhitungan dilakukan terhadap petri dengan jumlah koloni bakteri
antara  30-300.Total  Plate  Countdinyatakan  sebagai  jumlah  koloni  bakteri
hasil perhitungan dikalikan faktor pengencer.
Teknik  pengenceran  sampel  dilakukan  pada  metode  cawantuang  (pour
plate).  Pada  metode  tuang,  sejumlah  sampel  dari  hasil  pengenceran
sebanyak  1  ml  dimasukkan  kedalam  cawan  petri,  kemudian  ditambahkan
media  yang  telah  disterilkan  sebanyak  15-20  ml.  Kemudian  cawan  petri
digoyang agar media dan sampel tercampur rata dan biarkan memadat. Hal
14
ini  akan  menyebarkan  sel-sel  bakteri  tidak  hanya  pada  permukaan  media
yang kaya oksigen, tetapi ada pula yang tumbuh didalam media yang tidak
begitu  banyak  mengandung  oksigen.  Secara  keseluruhan  tahap  dalam
metode cawan tuang (pour plate) ini dijelaskan pada gambar berikut.
Gambar 2. Proses inokulasi bakteri, penuangan media dan
penghomogenan larutan
Sementara pada metode lainnya yaitu metode goresan, proses penanaman
bakteri  hanya  dilakukan  di  permukaan  bakteri  saja.Teknik  ini
menguntungkan  jika  ditinjau  dari  sudut  ekonomi  dan  waktu,  tetapi
memerlukan  keterampilan-keterampilan  yang  diperoleh  dengan  latihan.
Penggoresan  yang  sempurna  akan  menghasilkan  koloni  yang  terpisah.
Tetapi  kelemahan  metode  ini  adalah  bakteri-bakteri  anaerob  tidak  dapat
tumbuh, karena goresan hanya dilakukan di permukaan media saja.
Gambar 3. Pertumbuhan bakteri pada metode Spread plate dan Pour
plate
Pada  gambar  diatas  dapat  anda  lihat  bahwa  pada  metode  goresan  atau
spread  plate,  bakteri  hanya  tumbuh  pada  permkaan  media  yang  digores
15
saja, sementara pada metode cawan tuang atau  pour plate, bakteri tumbuh
tidak hanya di permukaan media saja tetapi diseluruh bagian media.
Dalam  melakukan  teknik  goresan  harus  memperhatikan  beberapa  hal
berikut ini, antara lain:
1.  Gunakan  jarum  ose  yang  telah  dingin  untuk  menggores  permukaan
lempengan  media.  Jarum  ose  yang  masih  panas  akan  mematikan
mikroorganisme  sehingga  tidak  terlihat  adanya  pertumbuhan
mikroorganisme di bekas goresan.
2.  Sewaktu  menggores,  jarum  ose  dibiarkan  meluncur  diatas  permukaan
lempengan.  Media  agar  yang  luka  akan  mengganggu  pertumbuhan
mikroorganisme, sehingga sulit diperoleh koloni yang terpisah.
3.  Jarum  ose  harus  dipijarkan  kembali  setelah  menggores  suatu  daerah,
hal  ini  dengan  tujuan  mematikan  mikroorganisme  yang  melekat  pada
mata  jarum  ose  dan  mencegah  kontaminasi  pada  penggoresan
berikutnya.
4.  Menggunakan  tutup  cawan  petri  untuk  melindungi  permukaan  supaya
terhindar dari kontaminasi.
5.  Membalikkan  lempengan  media  agar  untuk  mencegah  air  kondensasi
jatuh diatas pemukaan media.
Ada beberapa teknik penggesekan, yaitu
1.  Goresan T
  Lempengan  dibagi  menjadi  3  bagian  dengan  huruf   T  pada  bagian
luar cawan petri.
16
  Inokulasikan  daerah  I  sebanyak  mungkin  dengan  gerakan
sinambung.
  Panaskan mata jarum ose dan biarkan dingin kembali.
  Gores  ulang  daerah  I  sebanyak  3-4  kali  dan  teruskan  penggoresan
pada daerah II
  Ulangi prosedur diatas untuk melakukan penggoresan untuk daerah
III
Gambar 4. Goresan T kuadran 3
2.  Goresan Kuadran, teknik ini sama dengan goresan T, hanya lempengan
agar dibagi menjadi 4
Gambar 5. Goresan T kuadran 4
3.  Goresan Radian
  Goresan dimulai dari bagian pinggir lempengan.
  Pijarkan mata jarum ose dan dinginkan kembali
  Putar lempengan agar 90
0
dan buat goresan terputus diatas goresan
sebelumnya
17
4.  Goresan Sinambung
  Ambil  satu  mata  ose  suspense  dan  goreskan  setengah  permukaan
lempengan agar
  Jangan pijarkan ose, putar lempengan 180
0
, gunakan sisi mata ose
yang sama dan gores pada sisa permukaan lempengan agar.
Gambar 6. Goresan Sinambung
c.  Perhitungan Koloni Bakteri
Untuk  melaporkan  analisis  mikrobiologi  digunakan  suatu  standar  yang
disebut  “Standard  Plate  Count”  yang  menjelaskam  cara  menghitung  koloni
pada  cawan  serta  cara  memilih  data  yang  ada  untuk  menghitung  jumlah
koloni  dalam  suatu  contoh.  Cara  menghitung  koloni  pada  cawan  harus
memperhatikan hal-hal berikut ini :
  Cawan  yang  dipilih  dan  dihitung  adalah  yang  mengandung  jumlah
koloni antara 25 sampai 250.
Dari berbagai informasi yang telah
anda dapatkan, jika ada yang belum
dimengerti, silahkan tanyakan pada
guru anda!
18
  Beberapa  koloni  yang  bergabung  menjadi  satu  merupakan  suatu
kumpulan koloni yang besar dimana jumlah koloninya diragukan, dapat
dihitung sebagai satu koloni.
  Suatu deretan atau rantai koloni yang terlihat seperti suatu garis tebal
dihitung sebagai satu koloni.
Sedangkan data  yang dilaporkan sebagai  Standard  Plate Count (SPC) harus
mengikuti peraturan sebagai berikut (SNI 01-2897-1992):
1)  Dipilih  cawan  petri  dari  satu  pengenceran  yang  menunjukkan  jumlah
koloni antara 25-250 koloni.
Contoh:
Pengenceran  Cawan I  Cawan II  Keterangan
10
-2
150 350 Yang  memenuhi  syarat
perhitungan  adalah
cawan 1
10
-3
20 35 Yang  memenuhi  syarat
perhitungan  adalah
cawan II
Jumlah  koloni  rata-rata  Jumlahkedua  cawan  yang  memenuhi  syarat
dikalikan dengan faktor pengencerannya.
Perhitungan Total Plate Countadalah :
(150 x 1/10
-2
) + (25 x 1/10
-3
) =(150 x 10
2
) + (25 x 10
3
)
2 2
= 15.000 + 25.000 =20.000
2
Maka jumlah koloni dalam 1 ml adalah 20.000 cfu/ml
2)  Bila  salah  satu  dari  cawan  petri  menunjukkan  jumlah  koloni  ≤25  atau
≥250  maka  hitunglah  jumlah  rata-rata  koloni,  kemudian  dikalikan
dengan faktor pengencerannya .
19
Contoh :
Pengenceran  Cawan I  Cawan II  Jumlah Koloni Rata-Rata
10
-2
200  300  =(200 + 300) x 10
-2
2
= 250 x 10
-2
10
-3
15  25  = (15 + 25) x 10
-3
2
= 20 x 10
-3
PerhitunganTotal Plate Countadalah :
= (250 x 1/10
-2
) + (20 x 1/10
-3
) = (250 x 10
2
) + (20 x 10
3
)
2 2
= 25.000 + 20.000
2
= 22.500
Maka jumlah koloni dalam 1 ml adalah 22.500 cfu/ml
3)  Bila  cawan-cawan  dari  dua  tingkat  pengenceran  yang  berurutan
menunjukkan  jumlah  koloni  antara  25-250   hitunglah  jumlah  koloni
dari  masing-masing  tingkat  pengenceran,  dikalikan  dengan  faktor
pengencerannya  dan  rata-rata  jumlah  koloni  dari  kedua  pengenceran
tersebut.
Contoh:
Pengenceran  Cawan I  Cawan II  Jumlah Koloni Rata-rata
10
-2
215  225  = (215 + 225) x 10
-2
2
= 220 x 10
-2
10
-3
55 45 = (55 + 45) x 10
-3
2
= 50 x 10
-3
PerhitunganTotal Plate Countadalah :
= (220 x 1/10
-2
) + (50 x 1/10
-3
) = (220 x 10
2
) + (50 x 10
3
)
2 2
= 22.000 + 50.000
2
= 36.000
Maka jumlah koloni dalam 1 ml adalah 36.000 cfu/ml
20
4)  Bila  hasil  perhitungan  diatas,  pada  tingkat  pengenceran  yang  lebih
tinggi  diperoleh  jumlah  koloni  rata-rata  ≥2kali  jumlah  koloni  rata-rata
pengenceran dibawahnya, maka dipilih tingkat pengenceran yang lebih
rendah.
Contoh:
Pengenceran  Jumlah Koloni Rata-rata
10
-2
140
10-3    32
Maka Total Plate Countadalah 140x10
2
cfu/ml
5)  Bila  tidak  satupun  koloni  tumbuh  dalam  cawan,  maka  Total  Plate
Countdinyatakan sebagai <1 dikalikan faktor pengenceran terendah.
Contoh:
Pengenceran  Jumlah Koloni
10
-2
0
10
-3
0
Maka Total Plate Countadalah<1x 10
2
6)  Jika seluruh cawan menunjukkan jumlah koloni ≥250, dipilih cawan dari
tingkat  pengenceran  tertinggi  kemudian  dibagi  menjadi  beberapa
bagian  atau  sector  (2,4,  atau  8)  dan  dihitung  jumlah  koloni  dari  satu
sektor
Contoh:
Pengenceran  Cawan I (1 Sektor)   Cawan II (1 Sektor)
10
-2
100   150
10
-3
175  200
Selanjutnya  ,Total  Plate  Countdidapatkan  dari  hasil  jumlah  koloni
dikalikan dengan jumlah sektor, kemudian dihitung rata-rata dari kedua
cawan dan dikalikan dengan faktor pengenceran .
21
Contoh:
Jumlah sektor : 4
Pengenceran  Cawan I Cawan II Jumlah  Koloni
Rata-rata
10
-2
Jumlah koloni 
100 x 4= 400
Jumlah koloni 
150 x 4 = 600
500 x 10
2
10
-3
Jumlah koloni 
175 x 4 = 700
Jumlah koloni 
200 x 4 = 800
750 x 10
3
PerhitunganTotal Plate Countadalah :
= (500 x 1/10
-2
) + (750 x 1/10
-3
) = (500 x 10
2
) + (750 x 10
3
)
2 2
= 50.000 + 750.000
2
= 400.000 = 40 x 10
4
Maka jumlah koloni dalam 1 ml adalah 40 x 10
4
cfu/ml
d.  Cara Menghitung dan Membulatkan Angka
Dalam  melaporkan  jumlah  koloni  atau  jumlah  koloni  perkiraan  hanya  2
angka  penting  yang  digunakan,  yaitu  angka  yang  pertama  dan  kedua.
Pembulatan  angka  keatas  dengan  cara  menaikkan  angka  kedua  menjadi
angka  yang  lebih  tinggi  jika  angka  ketika  adalah  6,7,8,atau  9.  Gunakanlah
angka  0  pada  masing-masing  angka  pada  digit  berikutnya.  Pembulatan
angka  kebawah  bila  angka  ketiga  adalah  1,2,3,  atau  4.  Bila  angka  ketiga
adalah  angka  5,  maka  bulatkanlah  keatas  jika  angka  kedua  merupakan
bilangan  ganjil  atau  bulatkan  kebawah  bila  angka  kedua  merupakan
bilangan genap.
·  
22
3.  Refleksi
Petunjuk :
1.  Tuliskan nama dan KD yang telah anda selesaikan pada lembar tersebut!
2.  Tuliskan jawaban pada pertanyaan pada lembar refleksi!
3.  Kumpulkan hasil refleksi pada guru anda
LEMBAR REFLEKSI
1.  Bagaimana kesan anda setelah mengikuti pembelajaran ini?
.............................................................................................. .........................................................
............................................................................................................................. ........................
2.  Apakah anda telah menguasai seluruh materi pembelajaran ini? Jika ada
materi yang belum dikuasai tulis materi apa saja.
............................................................................................................................. ..........................
.....................................................................................................................................................
3.  Manfaat apa yang anda peroleh setelah menyelesaikan pelajaran ini?
....................................................................... ................................................................................
............................................................................................................................. ........................
4.  Apa yang akan anda lakukan setelah menyelesaikan pelajaran ini?
............................................................................................................................. ..........................
.................................................................. ...................................................................................
5.  Tuliskan secara ringkas apa yang telah anda pelajari pada kegiatan
pembelajaran ini!
...................................................................................... .................................................................
............................................................................................................................. ........................
23
Lembar kerja 1.
1.  Tugas
Teknik Dilusi (Pengenceran)
Alat dan Bahan:
a.  Mikro pipet
b.  Pembakar bunsen
c.  Tabung reaksi dan rak
d.  Kultur mikroorganismAquades/larutan buffer pepto
4.  Tugas
a.  UJI KUALITAS AIR DENGAN METODA TPC (Total Plate Count)
1.  Tujuan
Setelah  menyelesaikan  tugas  ini  peserta  didik  mampu  melakukan
praktek  uji  kualitas  air  dan  makanan  dengan  metode  TPCsecara
terampil, cermat dan teliti.
2.  Alat dan Bahan
Alat :
  Stomacher
  Erlenmeyer
  Tabung reaksi
  Cawan petri
  Pipet ukur
  Inkubator
Bahan
  Nutrient Agar (NA)
  Triphenyl  Tetrazolium
Chloride (TTC) 0,5%
  akuades
24
3.  Cara Kerja
  Pembuatan Media
(a)  Timbanglah nutrient agar (NA) sebanyak 2,4 gram dan dimasukkan ke
dalam Erlenmeyer.
(b)  Tambahkan 100 mL akuades.
(c)  Panaskan dan aduk hingga mendidih, diamkan beberapa saat.
(d)  Tuang ke dalam 6 buah cawan petri dan bungkus cawan petri dengan
kertas
(e)  Masukkan  cawan  petri  kedalam  autoklaf  untuk  disterilisasi  selama  2
jam pada suhu 121
0
C dan tekanan 1 atm
  Uji Kualitas Air dengan Metode Total Plate Count(TPC)
(a) Siapkan  1  labu  erlenmeyer  berisi  90  ml  aquades  dan  5  tabung
reaksi  berisi  aquades  9  ml.  Berilah  kode  A,  B,  C,  D,  E,  dan  F.
Kemudian  siapkan  medium  yang  telah  disterilkan  dan  berilah
kode A, B, C, D, E, dan F.
(b)  Secara  aseptis  masukkan  10  ml  sampel  air  kedalam  labu
Erlenmeyer berisi 90 ml aquades kemudian aduk hingga homogen.
Ambillah  1  ml  larutan  dari  Erlenmeyer  dan  masukkan  kedalam
tabung  reaksi  A.  Lalu  kocoklah  tabung  tersebut  secara  perlahan
hingga larutan menjadi homogen. Kemudian ambillah 1 ml larutan
dari  tabung  reaksi  A  dan  masukkan  kedalam  tabung  reaksi  B,
kocok perlahan hingga menjadi homogeny. Lakukan pengenceran
bertahap  tersebut  sampai  dengan  tabung  F  sehingga  didapat
larutan dengan tingkat pengenceran 10
-1
, 10
-2
, 10
3
, 10
-4
, 10
-5
, dan
10
-6
.
(c) Secara aseptis, ambillah 0,1 ml larutan dari masing-masing tabung
reaksi  dan  masukkan  kedalam  cawan  petri  yang  telah  berisi
medium  steril  dengan  kode  yang  sesuai.  Putar  atau  goyangkan
cawan petri tersebut tercampur rata.
25
(d)  Inkubasi biakan tersebut pada suhu 37
0
C. Setelah 1x 24 jam atau 2
x 24 jam, amati dan hitunglah jumlah koloni bakteri yang tumbuh
pada cawan petri dengan rumus yang telah dijelaskan pada uraian
materi.
  Uji  Kualitas  Mikrobiologi  Makanan  Berdasarkan  Total  Plate
CountKoloni Bakteri
1)  Tujuan:
Agar siswa dapat menghitung koloni bakteri yang terdapat dalam
sampel bahan makanan dengan metode TPC(Total Plate Count)
2)  Alat dan Bahan
  Koloni counter
  Vortex
  Rak tabung reaksi
  Blender atau mortar
  Pipet ukur 10 ml, 1 ml, dan 0,1 ml
  Inkubator
  Lampu spiritus
  Sampel makanan 10 gr
  Medium lempeng (Nutrient Agar)(6 buah)
  Aquades sebanyak 90 ml
  Aquades @9ml sebanyak 5 tabung
  Alkohol 70%
3)  Cara Kerja
  Pembuatan Media
(a)  Timbanglah  nutrient  agar  (NA)  sebanyak  2,4  gram  dan
dimasukkan ke dalam Erlenmeyer.
(b)  Tambahkan 100 mL akuades.
26
(c)  Panaskan dan aduk hingga mendidih, diamkan beberapa saat.
(d)  Tuang ke dalam 6 buah cawan petri dan bungkus cawan petri
dengan kertas
(e)  Masukkan  cawan  petri  kedalam  autoklaf  untuk  disterilisasi
selama 2 jam pada suhu 121
0
C dan tekanan 1 atm
  Uji  Kualitas  Makanan  dengan  Metode  Angka  Lempeg
Total (TPC)
a)  Siapkan  1  labu  erlenmeyer  berisi  90  ml  aquades  dan  5
tabung reaksi berisi aquades 9 ml. Berilah kode A, B, C, D,
E,  dan  F.  Kemudian  siapkan  medium  yang  telah
disterilkan dan berilah kode A, B, C, D, E, dan F.
b)  Timbanglah  10  gr  bahan  makanan,  secara  aseptis
masukkan kedalam labu Erlenmeyer berisi 90 ml aquades
kemudian  aduk  hingga  homogen.  Ambillah  1  ml  larutan
dari Erlenmeyer dan masukkan kedalam tabung reaksi A.
Lalu  kocoklah  tabung  tersebut  secara  perlahan  hingga
larutan  menjadi  homogen.  Kemudian  ambillah  1  ml
larutan  dari  tabung  reaksi  A  dan  masukkan  kedalam
tabung  reaksi  B,  kocok  perlahan  hingga  menjadi
homogeny.  Lakukan  pengenceran  bertahap  tersebut
sampai dengan tabung F sehingga didapat larutan dengan
tingkat pengenceran 10
-1
, 10
-2
, 10
3
, 10
-4
, 10
-5
, dan 10
-6
.
c)  Secara  aseptis,  ambillah  0,1  ml  larutan  dari  masingmasing tabung reaksi dan masukkan kedalam cawan petri
yang telah berisi medium steril dengan kode yang sesuai.
Putar  atau  goyangkan  cawan  petri  tersebut  tercampur
rata
d)  Inkubasi  biakan  tersebut  pada  suhu  37
0
C.  Setelah  1x  24
jam  atau  2  x  24  jam,  amati  dan  hitunglah   jumlah  koloni
27
bakteri  yang  tumbuh  pada  cawan  petri  dengan  rumus
yang telah dijelaskan pada uraian materi.
5.  Latihan Pembelajaran
1.  Jelaskan apa yang dimaksud dengan  perhitungan mikroba dengan metode
TPC?
2.  Jelaskan bagaimana hubungan antara jumlah mikroorganisme dalam suatu
bahan dengan kualitas produk!
3.  Jelaskan teknik pengenceran bertingkat!
4.  Jelaskan keuntungan dan kelemahan metode TPC!
Dari  hasil  lembar  kerja  diatas,  buatlah  laporan
mengenai nilai dari Angka Lempeng Total koloni
bakteri  dalam  tiap  gram  atau  ml  sampel
(tergantung  dari  sampel  yang  diperiksa)  dan
presesntasikan didepan kelas.
28
C.  Penilaian
1.  Penilaian Sikap
Indikator
Penilaian
Teknik  Bentuk
Instrumen
Butir Soal/Instrumen
Sikap
2.1
  Menampilkan
perilaku rasa
ingin tahu
dalam
melakukan
observasi
  Menampilkan
perilaku
obyektif
dalam
kegiatan
observasi
  Menampilkan
perilaku jujur
dalam
melaksanaka
n kegiatan
observasi
2.2.  Mengom
promikan
hasil
observasi
kelompok
  Menampilkan
hasil kerja
kelompok
  Melaporkan
hasil diskusi
kelompok
Non Tes
Non Tes
Lembar
Observasi
Penilaian
sikap
Lembar
Observasi
Penilaian
sikap
1.  Rubrik Penilaian Sikap
No  Aspek
Penilaian
4  3  2  1
1  Menanya      
2  Mengamati      
3  Menalar      
4  Mengolah data      
5  Menyimpulkan       
6  Menyajikan      
Kriteria Terlampir
2.  Rubrik Penilaian Diskusi
No  Aspek
Penilaian
4  3  2  1
1  Terlibat penuh      
2  Bertanya      
3  Menjawab      
4  Memberikan
gagasan orisinil
5  Kerja sama       
6  Tertib 
29
Indikator
Penilaian
Teknik  Bentuk
Instrumen
Butir Soal/Instrumen
2.3
Menyumbang
pendapat
tentang
Pemeriksaan
Makan  dan
Minuman
dengan  metode
TPC
Non Tes Lembar
Observasi
Penilaian
sikap
3.  Rubrik Penilaian Presentasi
No  Aspek
Penilaian
4  3  2  1
1  Kejelasan
Presentasi
2  Pengetahuan       
3  Penampilan     
Pengetahuan
1.  Pemeriksaan
Makan  dan
Kualitas  Air
dengan
Metode TPC
Tes Uraian 1.  Jelaskan  apa  yang  dimaksud  dengan
perhitungan mikroba dengan metode
TPC?
2.  Jelaskan bagaimana hubungan antara
jumlah  mikroorganisme  dalam  suatu
bahan dengan kualitas produk!
3.  Jelaskan  teknik  pengenceran
bertingkat!
4.  Jelaskan  keuntungan  dan  kelemahan
metode TPC
Keterampilan
1.  Lembar
Kerja
Non Tes
(Tes
Unjuk
Kerja)
1.  Rubrik Sikap Ilmiah
No  Aspek
Penilaian
4  3  2  1
1  Menanya      
2  Mengamati      
3  Menalar      
4  Mengolah data      
5  Menyimpulkan       
6  Menyajikan  
30
Indikator
Penilaian
Teknik  Bentuk
Instrumen
Butir Soal/Instrumen
2.  Rubrik Penilaian Prosedur pengolahan
Aspek
Penilaiaan
4  3  2  1
Cara melakukan
proses pengolahan
Cara menuliskan
data hasil
pengamatan
Kebersihan dan
penataan alat
31
Lampiran Rubrik & Kriteria Penilaian :
a.  Rubrik Sikap Ilmiah
No  Aspek
Skor
4  3  2  1
1  Menanya      
2  Mengamati      
3  Menalar      
4  Mengolah data      
5  Menyimpulkan       
6  Menyajikan    
Kriteria
1.  Aspek menanya:
Skor 4   Jika pertanyaan yang diajukan sesuai dengan permasalahan yang
sedang dibahas
Skor 3  Jika pertanyaan yang diajukan cukup sesuai dengan
permasalahan yang sedang dibahas
Skor 2  Jika pertanyaan yang diajukan kurang sesuai dengan
permasalahan yang sedang dibahas
Skor 1  Tidak menanya
2.  Aspek mengamati :
Skor 4   Terlibat dalam pengamatan dan aktif dalam memberikan pendapat
Skor 3  Terlibat dalam pengamatan
Skor 2  Berusaha terlibat dalam pengamatan
Skor 1  Diam tidak aktif
3.  Aspek menalar
Skor 4   Jika nalarnya benar
Skor 3  Jika nalarnya hanya sebagian yang benar
Skor 2  Mencoba menalar walau masih salah
Skor 1  Diam tidak menalar 
32
4.  Aspek mengolah data :
Skor 4   Jika Hasil Pengolahan data benar semua
Skor 3  Jika hasil pengolahan data sebagian besar benar
Skor 2  Jika hasil pengolahan data sebagian kecil benar
Skor 1  Jika hasil pengolahan data salah semua
5.  Aspek menyimpulkan:
Skor 4   jika kesimpulan yang dibuat seluruhnya benar
Skor 3  jika kesimpulan yang dibuat seluruhnya benar
Skor 2  kesimpulan yang dibuat sebagian kecil benar
Skor 1  Jika kesimpulan yang dibuat seluruhnya salah
6.  Aspek menyajikan
Skor 4   jika   laporan  disajikan  secara   baik  dan  dapat  menjawabsemua
petanyaan dengan benar
Skor 3  Jika laporan disajikan secara baik dan hanya dapat menjawab sebagian
pertanyaan
Skor 2  Jika  laporan  disajikan  secara  cukup  baik  dan  hanya  sebagian  kecil
pertanyaan yang dapat di jawab
Skor 1  Jika  laporan  disajikan  secara  kurang   baik  dan  tidak  dapat  menjawab
pertanyaan
33
b.  Rubrik Penilaian Diskusi
No  Aspek
Penilaian
4  3  2  1
1  Terlibat penuh      
2  Bertanya      
3  Menjawab      
4  Memberikan gagasan orisinil      
5  Kerja sama       
6  Tertib     
Kriteria
1.  Aspek Terlibat penuh :
Skor 4   Dalam  diskusi  kelompok  terlihat  aktif,  tanggung  jawab,  mempunyai
pemikiran/ide, berani berpendapat
Skor 3   Dalam diskusi kelompok terlihat aktif, dan berani berpendapat
Skor 2   Dalam diskusi kelompok kadang-kadang berpendapat
Skor 1   Diam sama sekali tidak terlibat
2.  Aspek bertanya :
Skor 4   Memberikan pertanyaan dalam kelompok dengan bahasa yang jelas
Skor 3   Memberikan pertanyaan dalam kelompok dengan bahasa yang kurang
jelas
Skor 2   Kadang-kadang memberikan pertanyaan
Skor 1   Diam sama sekali tidak bertanya
3.  Aspek Menjawab :
Skor 4   Memberikan  jawaban  dari  pertanyaan  dalam  kelompok  dengan  bahasa  yang
jelas
Skor 3   Memberikan  jawaban  dari  pertanyaan  dalam  kelompok  dengan  bahasa  yang
34
kurang jelas
Skor  2   Kadang-kadang memberikan jawaban dari pertanyaan kelompoknya
Skor 1   Diam tidak pernah menjawab pertanyaan
4.  Aspek Memberikan gagasan orisinil :
Skor 4   Memberikan  gagasan/ide  yang  orisinil  berdasarkan  pemikiran
sendiri
Skor 3   Memberikan gagasan/ide yang didapat dari buku bacaan
Skor  2   Kadang-kadang memberikan gagasan/ide
Skor 1   Diam tidak pernah memberikan gagasan
5.  Aspek Kerjasama :
Skor 4   Dalam  diskusi  kelompok  terlibat  aktif,  tanggung  jawab  dalam
tugas,  dan  membuat  teman-temannya  nyaman  dengan
keberadaannya
Skor 3   Dalam  diskusi  kelompok  terlibat  aktif  tapi  kadang-kadang
membuat  teman-temannya  kurang  nyaman  dengan
keberadaannya
Skor  2   Dalam diskusi kelompok kurang terlibat aktif
Skor 1   Diam tidak aktif
6.  Aspek Tertib :
Skor 4   Dalam  diskusi  kelompok  aktif,  santun,  sabar  mendengarkan
pendapat teman-temannya
Skor 3   Dalam diskusi kelompok tampak aktif,tapi kurang santun
Skor 2   Dalam diskusi kelompok suka menyela pendapat orang lain
Skor 1   Selama terjadi diskusi sibuk sendiri dengan cara berjalan kesana
kemari
35
c.  Rublik Penilaian proses pengolahan
Aspek
Skor
4  3  2  1
Cara melakukan proses
pengolahan
Cara menuliskan data hasil
pengamatan
Kebersihan dan penataan alat    
Kriteria :
1.  Cara melakukan prosedur pengolahan :
Skor 4   :   jika seluruh tahapan proses dilakukan sesuai dengan prosedur
Skor 3  :   jika  sebagian  besar  tahapan  proses  dilakukan  sesuai  dengan
prosedur
Skor 2  :   jika   sebagian  kecil  tahapan  proses  dilakukan  sesuai  dengan
prosedur
Skor 1  :   jika tahapan proses tidak dilakukan sesuai dengan prosedur
d.  Cara menuliskan data hasil pengamatan :
Skor 4   :   jika  seluruh  data  hasil  pengamatan  dapat  dituliskan  dengan
benar
Skor 3  :   jika  sebagian  besar  data  hasil  pengamatan  dapat  dituliskan
dengan benar
Skor 2   :   jika   sebagian  kecil  data  hasil  pengamatan  dapat  dituliskan
dengan benar
Skor 1  :   jika tidak ada  data  hasil  pengamatan yang dapat dituliskan
dengan benar
No  Aspek
Penilaian
4  3  2  1
1  Kejelasan Presentasi      
2  Pengetahuan       
3  Penampilan         
36
2.  Kebersihan dan penataan alat :
Skor 4   :   jika  seluruh  alat  dibersihkan  dan  ditata  kembali  dengan
benar
Skor 3  :   jika  sebagian  besar  alat  dibersihkan  dan  ditata  kembali
dengan benar
Skor 2   :   jika   sebagian  kecil  alat  dibersihkan  dan  ditata  kembali
dengan benar
Skor 1   :   jika   tidak  ada  hasil  alat  dibersihkan  dan  ditata  kembali
dengan benar
e.  Rubrik Presentasi
Kriteria
1.  Kejelasan presentasi
Skor 4   Sistematika penjelasan logis dengan bahasa dan suara yang sangat
jelas
Skor 3  Sistematika  penjelasan  logis  dan  bahasa  sangat  jelas  tetapi  suara
kurang jelas
Skor 2  Sistematika penjelasan tidak logis  meskipun menggunakan  bahasa
dan suara cukup jelas
Skor 1  Sistematika penjelasan tidak logis  meskipun menggunakan  bahasa
dan suara cukup jelas
2.  Pengetahuan
Skor 4   Menguasai  materi  presentasi  dan  dapat  menjawab  pertanyaan  dengan
baik dan kesimpulan mendukung topik yang dibahas
Skor 3  Menguasai  materi  presentasi  dan  dapat  menjawab  pertanyaan  dengan
37
baik dan kesimpulan mendukung  topik yang dibahas
Skor 2  Penguasaan materi kurang meskipun bisa menjawab seluruh pertanyaan
dan kesimpulan tidak berhubungan dengan topik yang dibahas
Skor 1  Materi  kurang  dikuasai  serta  tidak  bisa  menjawab  seluruh  pertanyaan
dan kesimpulan tidak mendukung topik
3.  Penampilan
Skor 4   Penampilan  menarik,  sopan  dan  rapi,  dengan  penuh  percaya  diri  serta
menggunakan alat bantu
Skor 3  Penampilan cukup menarik, sopan, rapih dan percaya diri menggunakan
alat bantu
Skor 2  Penampilan kurang menarik, sopan,  rapi tetapi kurang percaya diri serta
menggunakan alat bantu
Skor 1  Penampilan  kurang  menarik,  sopan,  rapi  tetapi  tidak  percaya  diri  dan
tidak menggunakan alat bantu
38
Penilaian Laporan Observasi
No  Aspek
Skor
4  3  2  1
1
Sistematika
Laporan
Sistematika
laporan
mengandung
tujuan, masalah,
hipotesis,
prosedur, hasil
pengamatan dan
kesimpulan.
Sistematika
laporan
mengandung
tujuan,
masalah,
hipotesis
prosedur, hasil
pengamatan
dan
kesimpulan
Sistematika
laporan
mengandung
tujuan,
masalah,
prosedur hasil
pengamatan
dan
kesimpulan
Sistematika
laporan hanya
mengandung
tujuan, hasil
pengamatan
dan
kesimpulan
2
Data
Pengamatan
Data pengamatan
ditampilkan
dalam bentuk
table, grafik dan
gambar yang
disertai dengan
bagian-bagian
dari gambar
yang lengkap
Data
pengamatan
ditampilkan
dalam bentuk
table, gambar
yang disertai
dengan
beberapa
bagian-bagian
dari gambar
Data
pengamatan
ditampilkan
dalam bentuk
table, gambar
yang disertai
dengan bagian
yang tidak
lengkap
Data
pengamatan
ditampilkan
dalam bentuk
gambar yang
tidak disertai
dengan
bagian-bagian
dari gambar
3
Analisis  dan
kesimpulan
Analisis dan
kesimpulan tepat
dan relevan
dengan datadata hasil
pengamatan
Analisis dan
kesimpulan
dikembangkan
berdasarkan
data-data hasil
pengamatan
Analisis dan
kesimpulan
dikembangkan
berdasarkan
data-data hasil
pengamatan
tetapi tidak
relevan
Analisis dan
kesimpulan
tidak
dikembangkan
berdasarkan
data-data hasil
pengamatan
4
Kerapihan
Laporan
Laporan ditulis
sangat rapih,
mudah dibaca
dan disertai
dengan data
kelompok
Laporan ditulis
rapih, mudah
dibaca dan
tidak disertai
dengan data
kelompok
Laporan
ditulis rapih,
susah dibaca
dan tidak
disertai
dengan data
kelompok
Laporan
ditulis tidak
rapih, sukar
dibaca dan
disertai
dengan data
kelompok
39
Kegiatan Belajar 2. Penentuan Jumlah Koloni Kapang
A.  Deskripsi
Kapang adalah sekelompok mikroba yang tergolong dalam fungi dengan ciri khas
memiliki  filament  (miselium).Kapang  termasuk  mikroba  yang  penting  dalam
mikrobiologi  pangan  karena  selain  berperan  penting  dalam  industri  makanan,
kapang juga menjadi penyebab kerusakan pangan.Jumlah dan jenis kapang dalam
suatu makanan, dapat menentukan apakah makanan tersebut layak dikonsumsi.
B.  Kegiatan Belajar
1.  Tujuan Pembelajaran
Setelah melakukan pembelajaran ini, diharapkan siswa dapat :
a.  Mengetahui  konsep  dan  prinsip  cara  menentukan  jumlah  koloni  kapang
dengan cermat dan teliti
b.  Melakukan pengujian total kapang dalam sampel
c.  Menghitung jumlah total koloni kapang dalam sampel
2.  Uraian Materi
a.  Pengertian dan Ciri-Ciri Kapang
Banyak  istilah  yang  dipergunakan  untuk  menyebut  jamur  atau  fungi,
seperti  cendawan,  kapang,  lapuk  atau  khamir.Jamur  yang  berbentuk
filament  disebut  kapang,  sedangkan  khamir  biasanya  untuk  sebutan  yang
uniseluler  dan  yang  lebih  mencolok  penampilannya  disebut  jamur,
misalnya  jamur  merang,  jamur  kelentos,  dan  jamur  hijau.  Kapang  adalah
mikroba  yang  tergolong  dalam  fungi  memiliki  lebih  dari  satu  sel  berupa
benang  benang  halus  yang  disebut  hifa,  kumpulan  hifa  disebut  miselium,
dan  berkembang  biak  dengan  spora.  Kapang  termasuk  mikroba  yang
40
penting  dalam  mikrobiologi  pangan  karena  selain  brperan  penting  dalam
industri  makanan,  kapang  juga  banyak  menjadi  penyebab  kerusakan
pangan.
Gambar 7. Morfologi Kapang pada Media PDA
Berikut merupakan ciri-ciri kapang :
  Merupakan  organisme  yang  tidak  berklorofil,  oleh  karena  itu  bersifat
heterotrof. Hidup  sebagai  parasit,  saprofit,  dan  ada  pula  yang
bersimbiosis.
  Bersifat  eukarion  (mempunyai  inti  yang  sejati),  yaitu  materi  inti
dibungkus oleh membran inti.
  Ada yang bersel tunggal dan ada pula yang bersel banyak, yang bersel
banyak  berbentuk  benang  atau  filamen.  Berdasarkan  sifat  tersebut
Amatilah gambar kapang dibawah
ini! Amatilah ciri-ciri kapang yang
dapat anda lihat dari gambar
tersebut!
41
ukuran  jamur  sangat  bervariasi  dari  yang  sangat  kecil  (mikroskopis)
sampai yang berukuran cukup besar (makroskopis).
  Berkembang biak secara vegetatif dan generatif.
  Menyenangi  lingkungan  yang  agak  asam,  kurang  cahaya,  terutama  di
tempat-tempat lembab yang mengandung zat organik.
  Fungi yang bersel banyak tubuhnya tersusun dari benang-benang yang
disebut hifa, yang berdiameter 5-10 mikrometer. Hifa dapat bercabangcabang  membentuk  anyaman  yang  disebut  miselium.  Pada  beberapa
fungi,  dinding  sel  atau  dinding  hifa  mengandung  selulosa,  tetapi  pada
umumnya terutama terdiri atas nitrogen organik, yaitu kitin.
b.  Jenis jenis Kapang
Kapang  memiliki  berbagai  peran  dalam  kehidupan.  Ada  kapang  yang
bersifat  menguntungkan  ataupun  merugikan.  Seperti  yang  terdapat  pada
gambar dibawah ini
Gambar 8. Tempe dan Oncom
Dari hasil pengamatan bentuk kapang
dan informasi yang telah anda
dapatkan, jika masih ada yang belum
anda pahami, silahkan tanyakan
langsung ke guru anda.
42
Beberapa  jenis  kapang  yang  penting  dalam  mikrobiologi  pangan  antara
lain:
1)  Rhizopus
Rhizopus  sering  disebut  kapang  roti  karena  sering  tumbuh  dan
menyebabkan  kerusakan  pada  roti.  Selain  itu,  kapang  ini  juga  sering
dijumpai pada sayuran dan buah-buahan. Spesies Rhizopus yang sering
tumbuh  pada  roti  adalah  Rhizopus  stolonifer dan  Rhizopus  nigricans.
Selain  merusak  makanan,  Rhizopus  juga  berperan  dalam  pembuatan
beberapa  makanan  fermentasi,  misalnya  Rhizopus  Oligosporus dan
Rhizopus  Oryzae yang  digunakan  dalam  fermentasi  tempe  dan  oncom.
Morfologi rhizopus dapat dilihat pada gambar dibawah ini.
Pernahkan anda mengamati tempe
atau oncom? Amatilah produk pangan
tersebut. Carilah informasi mengenai
jenis kapang yang berperan dalam
produk makanan tersebut dan ciricirinya
43
Gambar 9. Morfologi Rhizopus
Sumber.
http://kehidupanalamsemesta.blogspot.com/2010/09/fungijamur.html
Dari gambar diatas, dapat disimpulkan bahwa ciri-ciri Rhizopus antara
lain:
a.  Hifa nonseptat
b.  Mempunyai stolon dan rhizoid yang berwarna gelap jika sudah tua
c.  Sporangiofora tumbuh pada titik dimana terbentuk juga rhizoid
d.  Sporangia biasanya besar dan berwarna hitam
e.  Kolumela agak bulat dan apofisis berbentuk seperti cangkir
f.  Tidak mempunyai sporangiola
g.  Membentuk  hifa  vegetatif  yang  melakukan  penetrasi  pada  substrat
dan     hifa  fertil  yang  memproduksi  sporangia  pada  ujung
sporangiofora
h.  Pertumbuhannya membentuk misellium seperti kapas
44
2)  Aspergillus
Aspergillus  merupakan  kapang  yang  tumbuh  pada  media  dengan
konsentrasi gula dan garam tinggi, oleh karena itu dapat tumbuh pada
makanan  dengan  kadar  air  rendah.  Salah  satu  jenis  dari  Aspergillus
yang berperan dalam fermentasi beberapa makanan tradisional adalah
Aspergillus  oryzae.  Jenis  kapang  ini  digunakan  dalam  fermentasi  tahap
pertama pembuatan kecap dan tauco.
Gambar  10. Aspergillus
Sumber. http://www.deanza.edu/faculty/mccauley/6a-labs-fungi-01.htm
Bersama teman sebangku anda, carilah jenis
spesies kapang rhizopus lainnya yang
berperan ataupun merugikan dalam
kehidupan kita sehari-hari.Carilah lewat
literatur yang mendukung seperti buku,
internet, jurnal, atau sumber lainnya.
45
Dari  gambar  diatas,  dapat  kita  lihat  bahwa  ciri  morfologi  Aspergillus
antara lain :
a.  Hifa septat dan miselium bercabang, biasanya tidak berwarna, yang
terdapat  dibawah  permukaan  merupakan  hifa  vegetatif  sedangkan
yang muncul diatas permukaan adalah hifa fertil.
b.  Koloni kelompok
c.  Konidiofora septat dan nonseptat
d.  Konidiofora membesar menjadi vesikel pada ujungnya
e.  Sterigmata biasanya sederhana berwarna atau tidak berwarna
f.  Konidia membentuk rantai yang berwarna hijau, coklat, atau hitam
g.  Beberapa spesies tumbuh baik pada suhu 37
0
C atau lebih
c.  Mutu Produk dan Jumlah kapang
Kapang  dapat  bersifat  menguntungkan  dan  merugikan.Beberapa  jenis
kapang  bersifat  merugikan  karena  kapangmembentuk  mikotoksin  yang
dikenal  sebagai  penyebab  keracunan  akut  (Depkes  RI,  1998).Salah  satu
contoh  mikotoksin  yang  diproduksi  oleh  kapang  yang  sering  mencemari
makanan  adalah  Aflatoksin.Toksin  ini  dihasilkan  oleh  kapang  Aspergillus
flavus dan  mencemari  bahan  makanan  seperti  kacang-kacangan,  jagung,
dan serealia.
Berbeda  dengan  toksin  yang  diproduksi  oleh  bakteri,  mikotoksin  pada
umumnya  tidak  menyebabkan  penyakit  yang  bersifat  akut.  Tetapi
timbulnya penyakit biasanya disebabkan oleh konsumsi mikotoksin dalam
jumlah  kecil  secara  berulang-ulang  dalam  jangka  waktu  yang  lama
(Supardi, 1999)
Bersama dengan teman sebangku anda, carilah jenis spesies
aspergilus lainnya yang berperan dalam produk makanan.
46
Keadaan makanan yang telah ditumbuhi kapang yang tidak diinginkan pada
permukaannya  menandakan  bahwa  makanan  tersebut  tidak  aman  untuk
dikonsumsi.Membersihkan kapang pada makanan melalui pencucian tidak
dapat  mengurangi  kemungkinan  bahaya  yang  timbul  karena  toksin  yang
diproduksi oleh kapang selama pertumbuhannya dapat terserap ke bagian
dalam  makanan.Umumnya  mikotoksin  bersifat  tahan  panas,  sehingga
pengolahan atau pemanasan tidak menjamin hilangnya atau berkurangnya
keaktifan mikotoksin yang ada.
d.  Teknik atau Prosedur Analisis Jumlah Kapang
Media  yang  paling  umum  digunakan  untuk  menumbuhkan
jamur/kapang/fungi  adalah  media  PDA  (Potato  Dextrose  Agar).  Bahan
baku utama media ini adalah ekstrak kentang dengan penambahan sumber
karbon berupa dextrose.
Dibawah  ini  merupakan  contoh  pengujian  uji  kapang  menurut  MA  PPOM
90/MB/85:
Isolasi Kapang
a.  Jika berupa sampel cair, Ambillah sampel dengan pipet sebanyak 10 ml
dan  masukkan  kedalam  Erlenmeyer  steril  serta  tambahlah  larutan
pengencer 90 ml, kemudian kocok sehingga diperoleh suspense dengan
pengenceran 10
-1
Bersama  dengan  kelompok  anda,  Carilah
informasi mengenai persyaratan standar mutu
jumlah  kapang   pada  beberapa   produk
makanan
47
Jika  berupa  sampel  padat,  ambillahsebanyak  25  g  sampel   kemudian
tambahkan  larutan  pengencer  sebanyak  225  ml  sehingga  diperoleh
suspense dengan pengenceran 10
-1
.
b.  Siapkan  5  tabung  steril  yang  masing-masing  telah  diisi  dengan  9  ml
larutan pengencer
c.  Dari  pengenceran  10
-1
,  pipetlah  sebanyak  1  ml  dan  masukkan  pada
tabung 1 sehingga diperoleh pengenceran 10
-2
d.  Selanjutnya,  buatlah  pengenceran  hingga  10
-5
 atau  sesuai  yang
diperlukan
e.  Dari  setiap  pengenceran  ambillah  1  ml  dan  dimasukkan  ke  dalam
cawan petri steril dan dibuat duplo
f.  Ke  dalam  setiap  cawan  petri  tersebut  tuangi  media  PDA  (Potato
Dextrose Agar) sebanyak 5-20 ml
g.  Goyang  dan  putarlah  cawan  petri   sedemikian  rupa  hingga  larutan
menyebar merata
h.  Setelah media memadat, inkubasi pada suhu 20-25
0
C selama 3-7 hari.
Amati dan hitunglah jumlah koloni.
Gambar  11. Prosedur isolasi kapang
48
Perhitungan Koloni
Perhitungan koloni kapang berdasarkan pada syarat-syarat berikut ini.
(1)  Jika  anda  mendapatkan  cawan  yang  mengandung  jumlah  koloni
sebanyak 10-150 koloni, maka rumus perhitungan yang digunakan
adalah sebagai berikut.
N =  ∑ C
[( 1 X n1 ) + ( 0,1 x n2)] x ( d )
Dengan :
N : Jumlah koloni produk, dinyatakan dalam koloni per ml atau
koloni per g.
∑C:  Jumlah koloni pada semua cawan yang dihitung
n1   : Jumlah cawan pada pengenceran pertama yang di hitung
n2  : Jumlah cawan pada pengenceran kedua yang di hitung
d  :   Pengenceran pertama yang di hitung.
CONTOH :
Dilakukan  suatu  pengujian  kapang  terhadap  tempe  yang  telah
membusuk. Dari hasil pengujian didapatkan hasil sebagai berikut.
Pengenceran  1:100 (10
-2
)  1:1000 (10
-3
)
Jumlah Koloni  132 dan 144  23 dan 18
Dari data tersebut dapat dilihat bahwa pada seri pengenceran 10
-2
didapatkan  jumlah  koloni  sebanyak  132  koloni  (di  cawan  1)  dan
144  koloni  (di  cawan  2).Sementara  pada  seri  pengenceran  10
-3
didapatkan  jumlah  koloni  sebanyak  23  koloni  dan  18  koloni.Dari
data  tersebut  kemudian  dimasukkan  kedalam  rumus  perhitungan
koloni sebagai berikut:
49
N =  ∑ C
[( 1 X n1) + ( 0,1 x n2 )] x ( d )
N = ( 132 + 144 + 23 + 18 )
[( 1 x 2 ) + ( 0,1 x 2 )] 10
2
= 317/0,022
= 14.409
= 14.000 koloni per g
Dari perhitungan tersebut, maka dapat disimpulkan bahwa dalam 1
gram tempe terdapat 14.000 koloni kapang.
(2)  Jika  jumlah  koloni  per  cawan  lebih  dari  150  pada  seluruh
pengenceran, maka laporkan hasilnya sebagai terlalu banyak untuk
dihitung  (TBUD),  tetapi  jika  salah  satu  pengenceran  mempunyai
jumlah  koloni  mendekati  150,  maka  laporkan  sebagai  perkiraan
jumlah kapang.
CONTOH:
Dalam  suatu  pengujian  jumlah  total  kapang  dalam  tempe
didapatkan hasil sebagai berikut:
Pengenceran  1  :  100
(10
-2
)
1  :  1000
(10
-3
)
1 : 10000
(10
-4
)
1:100000
(10
-5
)
Jumlah koloni  TBUD  TBUD  TBUD  155
Dari data tersebut, dapat dilihat bahwa pada pengenceran 10
-2
, 10
-3
,
dan  10
-4
m  jumlah  koloni  jauh  melebihi  150  koloni  sehingga
dinyatakan sebagai terlalu banyak untuk dihitng (TBUD).Sementara
pada  pengenceran  10
-5
,  terdapat  155  koloni.  Maka  perkiraan
kapang pada 1 gram tempe adalah 155 koloni.
50
Pelaporan
Dalam melaporkan perhitungan kapang harus memperhatikan halhal berikut, antara lain:
  Untuk  menghasilkan  perhitungan  yang  akurat  dan  teliti,  maka
laporkan  hasilnya  dengan  dua  angka  (  digit  )  pertama  sebagai
hasil pembulatan.
  Pembulatan keatas dengan cara menaikkan angka kedua menjadi
angka yang lebih tinggi bila angka ketiga adalah 6,7,8 atau 9 dan
gunakan  angka  0  untuk  masing-masing  angka  pada  digit
berikutnya.
  Pembulatan  kebawah bila  angka  ketiga adalah 1,2,3 atau 4. Bila
angka  ketiga  5,  bulatkan  keatas  bila  angka  kedua  ganjil  dan
bulatkan kebawah bila angka kedua itu genap.
CONTOH :
Hasil Perhitungan    Nilai TPC
12.700  13.000
12.400 12.000
15.500  16.000
14.500    14.000
•   Beri tanda bintang (*) untuk cawan yang kurang dari 10 koloni.
CONTOH :
Pengenceran : 1:100 1:1000
Jumlah Koloni  : 8 dan 0 2 dan 0
Perkiraan TPC Koloni : Lebih kecil 1.400*   per ml atau koloni per
g.
51
3.  Refleksi
Petunjuk :
1.  Tuliskan nama dan KD yang telah anda selesaikan pada lembar tersebut
2.  Tuliskan jawaban pada pertanyaan pada lembar refleksi!
3.  Kumpulkan hasil refleksi pada guru anda
Setelah membaca metode perhitungan total
koloni kapang diatas, bersama dengan
kelompok anda, carilah metode atau cara
pengujian perhitungan koloni kapang dalam
suatu makanan dan bandingkan hasil anda
dengan prosedur kerja yang ada didalam buku
ini
LEMBAR REFLEKSI
1.  Bagaimana kesan anda setelah mengikuti pembelajaran ini?
............................................................................................................................. .......................................
.............................................................................................................................................. ......................
2.  Apakah anda telah menguasai seluruh materi pembelajaran ini? Jika ada
materi yang belum dikuasai tulis materi apa saja.
............................................................................................................................. .......................................
..................................................................................................................................................... ...............
3.  Manfaat apa yang anda peroleh setelah menyelesaikan pelajaran ini?
................................................ .....................................................................................................................
........................................................................................................................................... ........................
4.  Apa yang akan anda lakukan setelah menyelesaikan pelajaran ini?
............................................................................................................................. ........................................
............................................................................................................................................. ......................
5.  Tuliskan secara ringkas apa yang telah anda pelajari pada kegiatan
pembelajaran ini!
...................................................................................................................................... ...............................
.................................................................................................... ...............................................................
52
Lembar kerja 1.
Tugas
Teknik Dilusi (Pengenceran)
Alat dan Bahan:
a.  Mikro pipet
b.  Pembakar bunsen
c.  Tabung reaksi dan rak
d.  Kultur mikroorganiTugas
4.  Tugas
a.  Pengamatan Kapang Kontaminan pada Makanan
1)  Tujuan
  Untuk mengetahui ciri-ciri morfologi makanan yang terkontaminasi
kapang
  Untuk  mengenal  beberapa  macam  kapang  yang  mengontaminasi
makanan
2)  Alat dan Bahan
Alat      
  Mikroskop
  Jarum inokulasi
  Spiritus
  Kaca benda
  Kaca penutup
  Pipet
53
Bahan
  Makanan yang terkontaminasi kapang (tempe, roti,oncom, dll)
  Alkohol 95%
  Larutan lactophenol
  Larutan lactophenol cotton blue
3)  Cara Kerja
a)  Lakukan  pengamatan  morfologi  koloni  pada  tiap  macam  kapang
pada makanan yang diamati
b)  Sediakan  kaca  benda  bersih,  lalu  lewatkan  diatas  nyala  api  lampu
spiritus
c)  Teteskan alcohol 95% diatas kaca benda tersebut
d)  Buatlah  sediaan  dari  tiap  macam  kapang  yang  tumbuh  pada
makanan yang tersedia, masing-masing 2 buah sediaan
e)  Teteskan  setetes  larutan  lactophenol  di  atas  sediaan  tersebut,
kemudian  tutuplah  dengan  kaca  penutup.  Teteskan  juga  larutan
lactophenol  cotton  blue  pada  sediaan  kapang  yang  lain,  lalu
tutuplah dengan kaca penutup
f)  Amatilah sediaan dibawah mikroskop. Perhatikan ada atau tidaknya
sekat  pada  hifa,  jenis  alat  perkembangbiakkan,  dan  ciri-ciri  koloni
jamur
g)  Selanjutnya  isilah  hasil  pengamatan  kelompok  anda  pada  tabel
berikut ini
Ciri  Koloni 1  Koloni 2
1.7.1.1.1.1.  Morfologi Koloni
a.  Warna koloni
b.  Sifat koloni
1.7.1.1.1.2.  Mikroskopis Kapang
a.  Miselium : ada/tidak
b.  Sekat hifa : ada/tidak
c.  Spora : ada/tidak
d.  Bentuk spora
54
b.  Menghitung Total Koloni Kapang dalam Sampel Makanan
1)  ALAT DAN BAHAN
Alat :
  Cawan petri
  Pipet ukur 1 mL
  Termometer
  Inkubator
  Neraca analitik
  Pipet ukur 25 mL
  Vortex Spatula
  Mikropipet Tip
  Botol sample
  Autoclave
  Pembakar
  Magnet stirer
  Hot plate
  Beaker glass
  Tabung reaksi Bulp
Bahan :
  Media PDA (Potato Dextro Agar)
  Aquadest
  Sample tepung
2)  PROSEDUR
Membuat Media
  Membersihkan kentang dan mengupasnya, kemudian cincang
sampai halus.
  Menimbang kentang yang sudah halus sebanyak 100 gram
55
  Memasukan kentang yang sudah ditimbang dalam beaker glass, dan
mengisinya dengan aquadest.
  Kemudian rebus selama 1 jam
  Menyaring kentang dan air rebusan dengan menggunakan kain
saring yang bersih.
  Menambahkan agar dan glukosa ke dalam filtrat, kemudian
memanaskannya kembali sampai agar larut.
  Menambahkan aquadest sampai volume semula.
  Menambahkan asam tartrat 10% hingga pH media mencapai 3,5-4,0
  Memindahkan media yang sudah jadi tersebut ke dalam erlenmeyer
yang steril
  Mensterilkan media dalam autoclave dengan suhu 121
o
C selama 15
menit
Persiapan alat dan bahan
  Menyiapkan tabung reaksi yang berisi aquadest steril sebanyak 9
mL dan botol untuk sampel, yang berisi aquadest steril sebanyak
225 gram
  Menyiapkan alat yang akan dipergunakan
  Mensterilkan alat yang akan dipergunakan dan tabung reaksi dan
botol yang berisi aquadest steril tadi dalam autoclave pada suhu
121
o
C selama 15 menit.
Pengenceran
  Menimbang sampel tepung sebanyak 25 gram dan memasukannya
ke dalam botol yang berisi aquadest steril 225 mL steril.
o Mengocoknya secara manual sebanyak ± 25 kali sampai homogen
  Membuat pengenceran dari 10
-1
sampai pengenceran yang
dibutuhkan
  Melakukan semua tahap secara aseptis
56
Inokulasi
  Memipet hasil pengenceran dalam tabung reaksi masing-masing 1
mL, dan memasukannya dalam cawan petri steril.
o Menuangkan media PDA steril hangat (suhu sekitar 45 ± 1
o
C)
sebanyak 15-20 mL, ke dalam cawan petri steril yang berisi hasil
pengenceran
  Menggerakan petri secara memutar atau membentuk angka delapan,
sehingga hasil pengenceran dan media dapat bercampur secara
homogen
  Melakukan setiap tahapan diatas secara aseptis
  Membiarkansampai media dalam cawan membeku atau mengeras
  Memasukan cawan petri tersebut dalam inkobator pada suhu 25oC
atau sekitar suhu kamar selama 5 hari, dan posisikan cawan petri
secara terbalik.
  Menghitung koloni kapang
5.  Latihan Pembelajaran
Jawablah pertanyaan dibawah ini
Gambarkan dan Jelaskan morfologi kapang secara keseluruhan
Bagaimana  pengaruh  jumlah  koloni  kapang  terhadap  mutu  produk  secara
keseluruhan?
Media apa yang umumnya digunakan dalam isolasi kapang?bagaimana proses
pembuatannya?
Bagaimana cara perhitungan total koloni kapang?
Apa tujuan dari perhitungan jumlah koloni kapang?
57
C.  Penilaian
1.   Penilaian Sikap
Indikator
Penilaian
Teknik  Bentuk
Instrumen
Butir Soal/Instrumen
Sikap
2.1
  Menampilkan
perilaku rasa
ingin tahu
dalam
melakukan
observasi
  Menampilkan
perilaku
obyektif
dalam
kegiatan
observasi
  Menampilkan
perilaku jujur
dalam
melaksanaka
n kegiatan
observasi
2.2 Mengom
promikan
hasil
observasi
kelompok
  Menampilkan
hasil kerja
kelompok
  Melaporkan
hasil diskusi
kelompok
Non Tes
Non Tes
Lembar
Observasi
Penilaian
sikap
Lembar
Observasi
Penilaian
sikap
1.  Rubrik Penilaian Sikap
No  Aspek
Penilaian
4  3  2  1
1  Menanya      
2  Mengamati      
3  Menalar      
4  Mengolah data      
5  Menyimpulkan       
6  Menyajikan      
Kriteria Terlampir
2.  Rubrik Penilaian Diskusi
No  Aspek
Penilaian
4  3  2  1
1  Terlibat penuh      
2  Bertanya      
3  Menjawab      
4  Memberikan
gagasan orisinil
5  Kerja sama       
6  Tertib 
58
Indikator
Penilaian
Teknik  Bentuk
Instrumen
Butir Soal/Instrumen
2.3
Menyumbang
pendapat
tentang  bahan
baku  atau
media  untuk
pembuatan
produk
makanan/
minuman/
bahan industri
Non Tes Lembar
Observasi
Penilaian
sikap
3.  Rubrik Penilaian Presentasi
No  Aspek
Penilaian
4  3  2  1
1  Kejelasan
Presentasi
2  Pengetahuan       
3  Penampilan     
Pengetahuan
a.  Prinsip dan
konsep cara
perhitungan
kapang
b.   Tujuan dari
menghitung
total koloni
kapang
c.  Menghitung
jumlah total
koloni kapang
dan cara
pelaporannya
Tes Uraian 1.  Gambarkan dan Jelaskan morfologi
kapang secara keseluruhan
2.  Bagaimana pengaruh jumlah koloni
kapang terhadap mutu produk secara
keseluruhan?
3.  Media apa yang umumnya digunakan
dalam isolasi kapang?bagaimana
proses pembuatannya?
4.  Bagaimana cara perhitungan total
koloni kapang?
5.  Apa tujuan dari perhitungan jumlah
koloni kapang?
Keterampilan
1.   Merangkai
alat / alat
peraga/mode
l sesuai
susunan yang
benar / alat
sterilisasi alat
dan bahan
2. Menggunakan
alat/ alat
peraga/mode
Non Tes
(Tes
Unjuk
Kerja)
1.  Rubrik Sikap Ilmiah
No  Aspek
Penilaian
4  3  2  1
1  Menanya      
2  Mengamati      
3  Menalar      
4  Mengolah data      
5  Menyimpulkan       
6  Menyajikan      
59
Indikator
Penilaian
Teknik  Bentuk
Instrumen
Butir Soal/Instrumen
l untuk
menghitung
jumlah total
koloni
kapang
2.  Rubrik Penilaian Prosedur pengolahan
Aspek
Penilaiaan
4  3  2  1
Cara melakukan
proses pengolahan
Cara menuliskan
data hasil
pengamatan
Kebersihan dan
penataan alat
60
Lampiran Rubrik & Kriteria Penilaian :
a. Rubrik Sikap Ilmiah
Kriteria
1. Aspek menanya:
Skor 4   Jika   pertanyaan  yang  diajukan  sesuai  dengan  permasalahan  yang
sedang dibahas
Skor 3  Jika pertanyaan yang diajukan  cukup  sesuai dengan permasalahan
yang sedang dibahas
Skor 2  Jika pertanyaan yang diajukan  kurang sesuai  dengan permasalahan
yang sedang dibahas
Skor 1  Tidak menanya
2. Aspek mengamati :
Skor 4   Terlibat dalam pengamatan dan aktif dalam memberikan pendapat
Skor 3  Terlibat dalam pengamatan
Skor 2  Berusaha terlibat dalam pengamatan
Skor 1  Diam tidak aktif
3.Aspek menalar
Skor 4   Jika nalarnya benar
Skor 3  Jika nalarnya hanya sebagian yang benar
Skor 2  Mencoba bernalar walau masih salah
Skor 1  Diam tidak beralar
No  Aspek
Penilaian
4  3  2  1
1  Menanya      
2  Mengamati      
3  Menalar      
4  Mengolah data      
5  Menyimpulkan       
6  Menyajikan        
61
4.Aspek mengolah data :
Skor 4   Jika Hasil Pengolahan data benar semua
Skor 3  Jika hasil pengolahan data sebagian besar benar
Skor 2  Jika hasil pengolahan data sebagian kecil benar
Skor 1  Jika hasil pengolahan data salah semua
5.Aspek menyimpulkan:
Skor 4   jika kesimpulan yang dibuat seluruhnya benar
Skor 3  jika kesimpulan yang dibuat seluruhnya benar
Skor 2  kesimpulan yang dibuat sebagian kecil benar
Skor 1  Jika kesimpulan yang dibuat seluruhnya salah
6.Aspek menyajikan
Skor 4   jika   laporan  disajikan  secara   baik  dan  dapat  menjawabsemua
pertanyaan dengan benar
Skor 3  Jika laporan disajikan secara baik dan hanya dapat menjawab sebagian
pertanyaan
Skor 2  Jika  laporan  disajikan  secara  cukup  baik  dan  hanya  sebagian  kecil
pertanyaan yang dapat di jawab
Skor 1  Jika  laporan  disajikan  secara  kurang   baik  dan  tidak  dapat  menjawab
pertanyaan
b.  Rubrik Penilaian Diskusi
No  Aspek
Penilaian
4  3  2  1
1  Terlibat penuh      
2  Bertanya      
3  Menjawab      
4  Memberikan gagasan orisinil      
5  Kerja sama       
6  Tertib         
62
Kriteria
1.Aspek Terlibat penuh :
Skor 4   Dalam  diskusi  kelompok  terlihat  aktif,  tanggung  jawab,
mempunyai pemikiran/ide, berani berpendapat
Skor 3   Dalam  diskusi  kelompok  terlihat  aktif,  dan  berani
berpendapat
Skor 2   Dalam diskusi kelompok kadang-kadang berpendapat
Skor 1   Diam sama sekali tidak terlibat
2.Aspek bertanya :
Skor 4   Memberikan pertanyaan dalam kelompok dengan bahasa yang jelas
Skor 3   Memberikan  pertanyaan  dalam  kelompok  dengan  bahasa  yang
kurang jelas
Skor 2   Kadang-kadang memberikan pertanyaan
Skor 1   Diam sama sekali tdak bertanya
3.Aspek Menjawab :
Skor 4   Memberikan  jawaban  dari  pertanyaan  dalam  kelompok  dengan
bahasa yang jelas
Skor 3   Memberikan  jawaban  dari  pertanyaan  dalam  kelompok  dengan
bahasa yang kurang jelas
Skor 2   Kadang-kadang  memberikan  jawaban  dari  pertanyaan
kelompoknya
Skor 1   Diam tidak pernah menjawab pertanyaan
3.  Aspek Memberikan gagasan orisinil :
Skor 4   Memberikan  gagasan/ide  yang  orisinil  berdasarkan  pemikiran
sendiri
Skor 3   Memberikan gagasan/ide yang didapat dari buku bacaan
Skor  2   Kadang-kadang memberikan gagasan/ide
Skor 1   Diam tidak pernah memberikan gagasan 
63
5. Aspek Kerjasama :
Skor 4   Dalam  diskusi  kelompok  terlibat  aktif,  tanggung  jawab  dalam
tugas,  dan  membuat  teman-temannya  nyaman  dengan
keberadaannya
Skor 3   Dalam  diskusi  kelompok  terlibat  aktif  tapi  kadang-kadang
membuat  teman-temannya  kurang  nyaman  dengan
keberadaannya
Skor 2   Dalam diskusi kelompok kurang terlibat aktif
Skor 1   Diam tidak aktif
6. Aspek Tertib :
Skor 4   Dalam  diskusi  kelompok  aktif,  santun,  sabar  mendengarkan
pendapat teman-temannya
Skor 3   Dalam diskusi kelompok tampak aktif,tapi kurang santun
Skor 2   Dalam diskusi kelompok suka menyela pendapat orang lain
Skor 1   Selama terjadi diskusi sibuk sendiri dengan cara berjalan kesana
kemari
c.  Rublik Penilaian Penggunaan Alat / bahan
Aspek
Skor
4  3  2  1
Cara merangkai alat      
Cara  menuliskan  data  hasil
pengamatan
Kebersihan dan penataan alat    
Kritera :
1. Cara merangkai alat :
Skor 4 : jika seluruh peralatan dirangkai sesuai dengan prosedur
Skor  3 : jika sebagian besar peralatan dirangkai sesuai dengan prosedur
Skor 2 : jika sebagian kecil peralatan dirangkai sesuai dengan prosedur
Skor 1 : jika peralatan tidak dirangkai sesuai dengan prosedur
64
2. Cara menuliskan data hasil pengamatan :
Skor 4 :   jika seluruh data hasil pengamatan dapat dituliskan dengan benar
Skor 3:   jika sebagian besar data hasil pengamatan dapat dituliskan dengan
benar
Skor 2 :   jika sebagian kecil  data hasil pengamatan dapat dituliskan dengan
benar
Skor 1 :   jika tidak ada data hasil pengamatan yang dapat dituliskan dengan
benar
3. Kebersihan dan penataan alat :
Skor 4 :   jika seluruh alat dibersihkan dan ditata kembali dengan benar
Skor 3 :   jika  sebagian  besar  alat  dibersihkan  dan  ditata  kembali  dengan
benar
Skor2 :   jika   sebagian  kecil  alat  dibersihkan  dan  ditata  kembali  dengan
benar
Skor  1 :   jika   tidak  ada  hasil  alat  dibersihkan  dan  ditata  kembali  dengan
benar
B.  Rubrik Presentasi
Aspek
Skor
4  3  2  1
Kejelasan Presentasi      
Pengetahuan       
Penampilan     
Kriteria
1.  Kejelasan presentasi
Skor 4   Sistematika  penjelasan  logis  dengan   bahasa  dan  suara  yang
sangat jelas
Skor 3  Sistematika  penjelasan  logis  dan  bahasa  sangat  jelas  tetapi  suara
kurang jelas
65
Skor 2  Sistematika penjelasan tidak logis meskipun menggunakan bahasa
dan suara cukup jelas
Skor 1  Sistematika penjelasan tidak logis meskipun menggunakan bahasa
dan suara cukup jelas
2.  Pengetahuan
Skor 4   Menguasai  materi  presentasi  dan  dapat  menjawab  pertanyaan
dengan baik dan kesimpulan mendukung topik yang dibahas
Skor 3  Menguasai  materi  presentasi  dan  dapat  menjawab  pertanyaan
dengan baik dan kesimpulan mendukung topik yang dibahas
Skor 2  Penguasaan  materi  kurang  meskipun  bisa  menjawab  seluruh
pertanyaan dan kesimpulan tidak berhubungan dengan topik yang
dibahas
Skor 1  Materi  kurang  dikuasai  serta  tidak  bisa  menjawab  seluruh
pertanyaan dan kesimpulan tidak mendukung topik
3.  Penampilan
Skor 4   Penampilan menarik, sopan  dan rapi, dengan penuh percaya diri
serta menggunakan alat bantu
Skor 3  Penampilan  cukup  menarik,  sopan,  rapih  dan  percaya  diri
menggunakan alat bantu
Skor 2  Penampilan  kurang  menarik,  sopan,  rapi  tetapi  kurang  percaya
diri serta menggunakan alat bantu
Skor 1  Penampilan kurang menarik, sopan, rapi tetapi tidak percaya diri
dan tidak menggunakan alat bantu
66
Penilaian Laporan Observasi
No  Aspek
Skor
4  3  2  1
1
Sistematika
Laporan
Sistematika
laporan
mengandung
tujuan,
masalah,
hipotesis,
prosedur,
hasil
pengamatan
dan
kesimpulan.
Sistematika
laporan
mengandung
tujuan,  ,
masalah,
hipotesis
prosedur,  hasil
pengamatan
dan kesimpulan
Sistematika
laporan
mengandung
tujuan,
masalah,
prosedur  hasil
pengamatan
dan kesimpulan
Sistematika
laporam  hanya
mengandung
tujuan,  hasil
pengamatan
dan kesimpulan
2
Data
Pengamatan
Data
pengamatan
ditampilkan
dalam  bentuk
table,  grafik
dan  gambar
yang  disertai
dengan
bagian-bagian
dari  gambar
yang lengka[
Data
pengamatan
ditampilkan
dalam  bentuk
table,  gambar
yang  disertai
dengan
beberapa
bagian-bagian
dari gambar
Data
pengamatan
ditampilkan
dalam  bentuk
table,  gambar
yang  disertai
dengan  bagian
yang  tidak
lengkap
Data
pengamatan
ditampilkan
dalam  bentuk
gambar  yang
tidak  disertai
dengan  bagianbagian  dari
gambar
3
Analisis  dan
kesimpulan
Analisis  dan
kesimpulan
tepat  dan
relevan
dengan   datadata  hasil
pengamatan
Analisis  dan
kesimpulan
dikembangkan
berdasarkan
data-data  hasil
pengamatan
Analisis  dan
kesimpulan
dikembangkan
berdasarkan
data-data  hasil
pengamatan
tetapi  tidak
relevan
Analisis  dan
kesimpulan
tidak
dikembangkan
berdasarkan
data-data  hasil
pengamatan
4
Kerapihan
Laporan
Laporan
ditulis  sangat
rapih,  mudah
dibaca  dan
disertai
dengan  data
kelompok
Laporan  ditulis
rapih,  mudah
dibaca  dan
tidak   disertai
dengan  data
kelompok
Laporan  ditulis
rapih,  susah
dibaca  dan
tidak  disertai
dengan  data
kelompok
Laporan  ditulis
tidak  rapih,
sukar   dibaca
dan  disertai
dengan  data
kelompok
67
Kegiatan Pembelajaran 3. Identifikasi Bakteri E. Coli dengan Metode IMVIC
A.  Deskripsi
Bakteri coliform adalah suatu kelompok bakteri yang digunakan sebagai indikator
adanya  polusi  dan  kondisi  yang  tidak  baik  terhadap  makanan  atau
minuman.Adanya  bakteri  coliform  dalam  suatu  makanan  dan  minuman
menunjukkan  kemungkinan  adanya  mikroba  yang  bersifat  enteropatogenik  atau
toksigenik yang berbahaya bagi kesehatan.
B.  Kegiatan Belajar
1.  Tujuan Pembelajaran
Setelah melakukan pembelajaran ini, diharapkan siswa dapat:
a.  Menerapkan  konsep  dan  prinsip  identifikasi  bakteri  e  coli menggunakan
metode MPN dan IMVIC
b.  Melakukan  identifikasi  bakteri  e  coli dengan  menggunakan  metode  MPN
dan IMVIC
2.  Uraian Materi
Sebelum masuk kealam materi pada kompetensi dasar ini,
apa yang ada ketahui tentang bakteri coliform khususnya
spesies Escherichia coli? Amati dan carilah informasi
mengenai bakteri coliform dari berbagai media.
68
a.  Escherichia coli
Bakteri  Escherichia  coli  merupakan  mikroflora  normal  pada  usus
kebanyakan  hewan  berdarah  panas.Bakteri  ini  tergolong  bakteri  gram
negatif,  berbentuk  batang,  tidak  membentuk  spora,  kebanyakan  bersifat
motil (dapat bergerak) menggunakan flagela, ada yang mempunyai kapsul,
dapat  menghasilkan  gas  dari  glukosa,  dan  dapat  memfermentasi  laktosa.
Kebanyakan  strain  tidak  bersifat  membahayakan,  tetapi  ada  pula  yang
bersifat patogen terhadap manusia, seperti  Enterohaemorragic Escherichia
coli  (EHEC).  Escherichia coli  merupakan tipe EHEC bersifat patogen terkait
dengan kesehatan masyarakat.E. coli dapat masuk ke dalam tubuh manusia
terutama  melalui  konsumsi  pangan  yang  tercemar,  misalnya  daging
mentah, daging yang dimasak setengah matang, susu mentah, dan cemaran
fekal pada air dan pangan.
Untuk  menghitung  bakteri Coliform (  Total Colifrom)  dapat  digunakan
metode MPN (MostProbableNumber). MPN merupakan suatu metode untuk
menghitung  jumlah  mikroba  dengan  menggunakan  media  cair  dalam
tabung  reaksi  yang  pada  umumnya  setiap  pengenceran  menggunakan  3
seri tabung dan perhitungan yang dilakukan merupakan tahap pendekatan
secara  statistik.  Tabung  positif  ditunjukkan  oleh  adanya  pertumbuhan
bakteri  dan  gas  (SNI  2332.9:2001).  Nilai  MPN  diperoleh  dengan  asumsi
sebagai berikut:
  Bakteri dalam contoh menyebar secara random
  Bakteri dalam contoh tidak berkelompok tetapi saling terpisah
  Organisme  yang  terdapat  dalam  contoh   dapat  tumbuh  dalam  media
selama inkubasi
  Kondisi yang sesuai untuk pertumbuhan seperti media, suhu, dan waktu
inkubasi.
Perhitungan  MPN  berdasarkan  pada  jumlah  tabung  reaksi  yang  positif,
yakni  yang  ditumbuhi  oleh  mikroba  setelah  diinkubasi  pada  suhu  dan
69
waktu  tertentu.  Pengamatan  tabung  yang  positif  dapat  dilihat  dengan
mengamati  timbulnya  kekeruhan  atau  terbentuknya  gas  di  dalam  tabung
kecil  (tabung  durham)  yang  diletakan  terbalik,  yaitu  jasad  renik  yang
membentuk gas (Waluyo, 2008).
Beberapa media yang biasa digunakan dalam analisa coliform antara lain:
Eosin Methylen Blue Agar(EMB Agar)
Eosin  methylene  blue  agar merupakan  salah  satu  media  selektif  yang
digunakan  untuk  isolasi  dan  identifikasi  bakteri  gram  negatif.Eosin  dan
pewarna  biru metilen menghambat  pertumbuhan bakteri gram positif dan
mendukung  pertumbuhan  bakteri  gram  negatif.Media  ini  mengandung
laktosa  dan  sukrosa.  Mikroba  yang  dapat  memfermentasi  laktosa  akan
menghasilkan  koloni  dengan  inti  berwarna  gelap  dan  kilap  logam,
sedangkan  mikroba  yang  tidak  dapat  memfermentasi  laktosa,  koloninya
tidak  berwana.  Adanya  eosin  dan  metilen  blue  membantu  mempertajam
perbedaan  tersebut.Media  ini  cocok  untuk  mengkonfirmasi  bahwa
kontaminan tersebut adalah E coli. Pada media ini,  E coliyang tumbuh akan
memberikan warna khas kemilau hijau metalik.
Gambar  12. E coli dalam media EMB Agar
Sumber. ASM microlibrary.org
70
Lactose Broth
Lactose  broth  digunakan  sebagai  media  untuk  mendeteksi  kehadiran
koliform  dalam  air,  makanan,  dan  produk  susu.  Pepton  dan  ekstrak  beef
menyediakan  nutrien  penting  untuk  metabolisme  bakteri.Laktosa
menyediakan  sumber  karbohidrat  yang  dapat  difermentasi  untuk
organisme  coliform.Media  ini  biasanya  digunakan  dalam  presumptive  test
atau  uji  penduga  untuk  bakteri  coliform.  Kehadiran  coliform  ditandai
dengan  munculnya  gas  pada  tabung  durham.  Lactose  broth  dibuat  dengan
komposisi 0,3% ekstrak beef; 0,5% pepton; dan 0,5% laktosa.
Gambar  13. Lactose broth positif coliform (kiri) dan Lactose broth
negative coliform (kanan)
Sumber.http://www.eplantscience.com/index/microbiology_methods/colour_
plates/colour_plates02.php
NutrientAgar(NA)
Nutrien agar adalah medium umum untuk uji air dan produk dairy. NA juga
digunakan untuk pertumbuhan mayoritas dari mikroorganisme yang tidak
selektif,  dalam  artian  mikroorganisme  heterotrof.  Media  ini  merupakan
media  sederhana  yang  dibuat  dari  ekstrak  beef,  pepton,  dan  agar.  Na
merupakan  salah  satu  media  yang  umum  digunakan  dalam  prosedur
bakteriologi  seperti  uji  biasa  dari  air,  sewage,  produk  pangan,  untuk
71
membawa  stok  kultur,  untuk  pertumbuhan  sampel  pada  uji  bakteri,  dan
untuk mengisolasi organisme dalam kultur murni. Untuk komposisi nutrien
adar adalah eksrak beef 10 g, pepton 10 g, NaCl 5 g, air desitilat 1.000 ml
dan  15  g  agar/L.  Agar  dilarutkan  dengan  komposisi  lain  dan  disterilisasi
dengan  autoklaf  pada  121°C  selama  15  menit.  Kemudian  siapkan  wadah
sesuai  yang  dibutuhkan.  Dalam  identifikasi  e  coli ini,  media  NA  berperan
sebagai media untuk menumbuhkan kultur murni dari e coli.
VRBA (Violet Red Bile Agar)
VRBA  dapat  digunakan  untuk  perhitungan  kelompok  bakteri
Enterobacteriaceae.  Agar  VRBA  mengandung  kristal  violet  yang  bersifat
basa,  sedangkan  sel  mikroba  bersifat  asam.  Bila  kondisi  terlalu  basa maka
sel  akan  mati.  Media  ini  mengandung  ekstrak  yeast,pepton,  salt,  bile,
glukosa,  kristal  violet,  neutral  red,  dan  agar.  Yeast  ekstrak  menyediakan
vitamin  B-kompleks  yang  mendukung  pertumbuhan  bakteri.  Laktosa
merupakan  sumber  karbohidrat.Neutral  red  sebagai  indikator  pH.Agar
merupakan  agen  pemadat.  Campuran  bile,  salt  dan  kristal  violet
menghambat  bakteri  gram  positif.Degradasi  laktosa  menjadi  asam
diindikasikan oleh pH indikator neutral red yang mengubah warna menjadi
merah dan mengendapkan asam bile.
MacConkey Agar
Media MacConkey Agar mempunyai keistimewaan memilah bakteri enteric
gram  negatif  yang  memfermentasi  laktosa  karena  media  ini  mengandung
laktosa, crystal violet dan neutral red bile salt. Penggabungan crystal violet
dan  neutral  red  bile  saltakan  menghambat  pertumbuhan  mikroba  gram
positif,  sedangkan  laktosa  merupakan  satu  satunya  sumber
karbohidrat.Kemampuan  e  coli  memfermentasi  laktosa  menyebabkan
penurunan  pH,  sehingga  mempermudah  absorbsi  neutral  red  untuk
72
mengubah  koloni  menjadi  merah  bata  dan  mengendapkan  bile  empedu.
Koloni  lain  (S.  aureus,  P.aeruginosa,  dan  Salmonella),  bila  tumbuh  tidak
akan  berwarna  karena  tidak mampu memfermentasi laktosa. Mikroba lain
yang  dapat  tumbuh  di  media  ini  antara  lain  Enterobacter,  Proteus,
Salmonella, Shigella, Aerobacter,Enterococcus
Gambar  14. MacConkey Agar dan MacConkey Agar yang ditumbuhi
bakteri
MacConkey Broth
MacCONKEY  broth  terdiri  dari  3  unsur  penting  yang  saling  menunjang,
yaitu  laktosa,  garam  dan  indikator.  Laktosa,  berfungsi  sebagai  agent  yang
bila  terdegradasi  akan  memproduksi  gas.  Gas  tersebut  menunjukkan
pertumbuhan  E. coli,gas yang terbentuk ditampung dalam tabung durham.
Garam,  dalam  hal  ini  digunakan  “ox  bile”  berfungsi  sebagai  selective
agent.Garam  menghambat  pertumbuhan  beberapa  organisme  pencernaan,
tetapi  tidak  untuk  E.  coli.Sedangkan  bromocresol  purple bertindak  sebagai
indikator.  E.  coli  yang  hidup  akan  memproduksi  asam.  Keberadaan  asam
tersebut akan mengubah warna bromocresol purpledari ungu ke kuning.
73
Gambar  15. MacConkey broth (ungu) dan MacConkey broth yang
ditumbuhi bakteri
Brilliant Green Lactose Bile Broth
Media Brilliant Green Lactose Bile Broth merupakan generasi penerus dari
Media  MacConkey  broth.Pada  tahun  1920-an,  media  BGLBB  mulai
dikenalkan  sebagai  media  deteksi  dan  konfirmasi  anggota  grup
aerogenes.Berbeda  dengan  MacConey  Broth,  Briliant  Green  Lactose  Bile
Broth  tidak  menggunakan  indikator.Komponen  utamanya  adalah  laktosa
(fermenting agent), garam (selective agent), dan brilliant green (completely
selective agent).
Keunikan  dari  media  ini  terdapat  pada  keseimbangan  penghambatan
brilliant  green  dan  garam.Garam  dan  brilliant  green  sangat  sempurna
menghambat pertumbuhan organisme clostridia yang mendegradasi laktosa
(lactose-degrading clostridia) seperti Clostridium perfingens. Cl. perfingens
sering  menyebabkan  kesalahan  hasil  positif  pada  tabung  durham,  karena
dapat memfermentasi laktosa dan menghasilkan gas.
74
Gambar  16.
http://85.238.144.18/analytics/Micro_Manual/TEDISdata/prods/1_0
5454_0500_5000.html
Identifikasi e coliDengan Metode MPN
Identifikasie coli didahului  dengan  pengenceran  sampel  yang  akan
dianalisis.  Pengenceran  dilakukan  dengan  cara  mencampurkan  sampel
dengan  berat  atau  volume  tertentu  pada  larutan  pengencer  yang  telah
disterilkan. Larutan pengencer yang biasa digunakan antara lain:
  Pengencer umum : 0,1% pepton + 0,85% natrium klorida (NaCl)
Dari berbagai informasi dan paparan
yang telah anda dapatkan, Jika masih
ada hal yang masih belum jelasn
dapat anda tanyakan langsung ke
guru anda.
75
  Pengencer untuk mikroba anaerobic
  Pengencer yang digunakan untuk pertumbuhan mikroba anaerob harus
mampu  menjaga  potensial  oksidasi  reduksipengencer  tetap  rendah.
Mikroba  anaerob  sangat  rentan  terhadap  oksigen,  sehingga  perlu
penggunaan  teknik  khusus  seperti  aplikasi  teknik  Hungate  atau
penggunaan ruang anaerobic.
  Pengencer untuk mikroba osmofilik dan halofilik
  Pengencer  yang  digunakan  untuk  mikroba  osmofilik  adalah  larutan
pengencer yang mengandung 20% larutan sukrosa steril.
  Pengencer  yang  digunakan  untuk  mikroba  halofilik  adalah  larutan
pengenceryang mengandung 15% natrium klorida (NaCl) steril.
Selanjutnya pengenceran akan lebih mudah dihitung jika dilakukan secara
desimal 1:10 (b/v atau v/v), misalnya 10 ml sampel dimasukkan ke dalam
90 ml atau 25 gr sampel  dimasukkan ke  dalam 225 ml larutan pengencer
sehingga diperoleh pengenceran 10
-1
. Selanjutnya, diambil sebanyak 10 ml
dari  pengenceran  pertama  dan  dimasukkan  kedalam  90  ml  pengeceran
kedua  sehingga  diperoleh  pengenceran  10
-2
.Kemudian  diulang  terus
sampai pada pengenceran yang kita harapkan.
Gambar  17. Seri pengenceran
76
Pada  prinsipnya,  ada  beberapa  tahapan  dalam  indentifikasi  e  coli  dengan
menggunakan metode MPN, antara lain: Uji penduga atau uji presumtif, uji
penegas  atau  uji  konfirmasi,  dan  uji  pelengkap.  Pengujian  MPN  Coliform
dan  Escherichia  coli  menggunakan  media  Lactose  broth  (LB)  dan  tabung
Durham.  LB  merupakan  media  perbenihan  selektif  yang  mengandung
laktosa.  Tabung  durham  digunakan  untuk  mengetahui  adanya
pembentukan  gas  oleh  bakteri  yang  terdapat  dalam  sampel  tersebut.
Terbentuknya  gas  dan  asam  menandakan  adanya  Escherichia  coli  dan
bakteri  Coliform.Jika  pada  suatu  uji  hanya  terbentuk  gas  menandakan
adanya  Coliform  tanpa  ada  Escherichia  coli.Terbentuknya  asam  ditandai
dengan  perubahan  warna  biakan  menjadi  kuning.Tabung  yang  belum
menunjukkan reaksi positif, diinkubasi lagi selama 24 jam.Jika setelah masa
inkubasi kedua ini ditemukan gas, maka dilanjutkan uji selanjutnya.Namun
apabila tetap tidak terbentuk gas, maka hasilnya dianggap negatif dan tidak
perlu dilakukan uji  lanjutan.Uji positif juga ditunjukkan dengan terjadinya
perubahan  warna  medium  yaitu  dari  merah  menjadi  kuning  atau
oranye.Tahap ini merupakan uji presumtif.
Gambar  18. Lactose Broth hasil negative (kiri) dan Lactose Broth hasil
positif ditandai dengan adanya perubahan warna media dan adanya
gas dalam tabung durham (kanan)
77
Sampel  yang  menunjukkan  uji  penduga   positif  dilanjutkan  ke  uji
penegasan. Uji penegasan atau uji konfirmasiColiformmenggunakan media
Brilliant  Green  Lactose  Bile  broth (BGLBB)  yang  didalamnya  dilengkapi
dengan  tabung  durham.  Kemudian  diinkubasi  24  jam  pada  suhu  37
0
C.  Uji
ini dinyatakan positif jika terbentuk gas dalam tabung durham.
Gambar  19. Hasil uji negative (kiri) dan hasil uji positif yang ditandai
adanya gelembung gas pada tabung durham (kanan)
Sampel  yang  menunjukkan  uji  penegasan  positif  dilanjutkan  ke  uji
pelengkap.Biakan  dalam  tabung  yang  positif  digorekan  ke  media  Eosin
Methylen  BlueAgar (EMBA)  yang  merupakan  media  diferensial  untuk
Escherichia  coli.Kemudian  diinkubasi  selama  48  jam  pada  suhu  37
0
C.
Koloni  spesifik  tumbuh  dengan  ciri-ciri  bentuk  bulat,  diameter  2-3  mm,
warna hijau dengan kilap logam dan bintik biru kehijauan di tengahnya.
Gambar  20. Media EMBA yang positif e coli
78
Koloni  tersebut  selanjutnya  diuji  pewarnaan  Gram,  diinokulasikan  ke
media  NA  (Nutrient  Agar)  miring.  Biakan  yang  diinokulasikan  ke  dalam
media NA selanjutnya diinkubasi pada suhu 37
0
C selama 24 jam. Kemudian
diamati perubahan warna dan gas yang terbentuk pada tabung berisi media
dan  biakan.  Secara  keseluruhan,  uji  coliform  dapat  digambarkan  seperti
dibawah ini
Gambar  21. Tahapan Uji Coliform dengan seri pengenceran 3 tabung
Setelah  melakukan  identifikasi  bakteri  tersebut,  selanjutnya  kita  dapat
melakukan  perhitungan  jumlah  bekteri  dengan  metode  Most  Probable
Number (MPN)
79
b.  Perhitungan Mikroba dengan Teknik Most Probable Number (MPN)
Ada  berbagai  teknik  dalam  perhitungan  mikroba.  Analisis  tersebut  antara
lain  analisis  kualitatif  dan  kuantitatif.  Apakah  anda  telah  mengetahui
tentang  analisis  kualitatif  dan  analisis  kuantitatif?  Dalam  kegiatan
pembelajaran ini, Kita akan membahas teknik MPN dalam analisis mikroba.
Apakah anda tahu, teknik MPN termasuk dalam ke analisis kuantitatif atau
kualitatif?
Teknik Most Probable Number(MPN) banyak digunakan untuk menghitung
populasi mikroba dalam bahan atau produk pangan.Metode ini merupakan
metode  untuk  memperkirakan  jumlah  mikroba  pada  sampel  secara  tidak
langsung.Berbeda  dengan  metode  cawan  yang  menggunakan  media  agar
atau  media  padat,  dalam  metode  MPN  digunakan  media  cair  yang
ditempatkan  dalam  tabung  reaksi.Perhitungan  MPN  didasarkan  pada
tabung  rekasi  yang  positif,  yaitu  tabung  yang  ditumbuhi  mikroba.
Pengamatan  tabung  yang  positif  dapat  dilihat  dari  timbulnya  kekeruhan
atau  timbulnya  gas  pada  tabung  durham  yang  diletakkan  pada  posisi
terbalik.
Metode MPN didasarkan pada pengenceran contoh. Prinsipnya, bila contoh
diencerkan  terus  menerus,  maka  pada  akhirnya  akan  diperoleh  larutan
yang  tidak  mengandung  mikroba  (steril).  Dalam  metode  MPN,  setiap
pengenceran  pada  umumnya  dengan  menggunakan  3  atau  5  seri  tabung.
Lebih  banyak  tabung  yang  digunakan  akan  menunjukkan  ketelitian  yang
lebih  tinggi.  Teknik  pengenceran  ini  akan  memberikan  hasil  baik  bila
asumsinya terpenuhi, yaitu:
1)  Sel mikroba tersebar merata dalam contoh dimana gaya tarik atau tolak
diantara mikroba tidak terjadi
2)  Larutan yang diinokulasi ke media akan memperlihatkan pertumbuhan
positif apabila mengandung satu atau lebih mikroba hidup
80
3)  Terhindar dari pencemaran yang berasal dari bahan dan peralatan.
Dari  setiap pengenceran, masing-masing dimasukkan 1 ml masing-masing
ke  dalam  tabung  yang  berisi  medium,  dimana  untuk  setiap  pengenceran
digunakan  3  atau  5  seri  tabung.  Setelah  inkubasi  pada  suhu  dan  waktu
tertentu, dihitung jumlah tabung yang positif. Misalnya, pada pengenceran
pertama  3  tabung  menghasilkan  pertumbuhan  positif,  pada  pengenceran
kedua  menghasilkan  2  tabung  yang  positif,  pada  pengenceran  ketiga
menghasilkan  1  tabung  positif,  dan  pada  pengenceran  terakhir  tidak
adatabung  yang  positif.  Dari  hasil  tersebut  didapatkan  kombinasinya
menjadi  3,2,1,0  dan  jika  diambil  3  pengenceran  pertama  kombinasinya
menjadi  3,2,1.  Angka  kombinasi  ini  kemudian  dicocokkan  dengan  tabel
MPN.   Kemudian  nilai  MPN  tersebut  dihitung  dengan  rumus  sebagai
berikut:
MPN sampel = Nilai MPN dari tabel x 1/pengenceran tabung tengah
Tabel  yang  digunakan  untuk  menentukan  nilai  MPN  dari  3  seri  tabung
berbeda dengan tabel untuk 5 seri tabung.
Gambar  22. Metode MPN seri pengenceran 5 tabung
(ungu : media/tidak terkontaminasi e coli, kuning : terkontaminasi e coli)
Sumber:http://www.qmlive.leeds.ac.uk/q4/session.watermicrobiology
81
Output metode  MPN  adalah nilai MPN.Nilai MPN  adalah perkiraan jumlah
unit  tumbuh  (growth  unit)  atau  unit  pembentuk-koloni  (colony-forming
unit)  dalam  sampel.Namun,  pada  umumnya,  nilai  MPN  juga  diartikan
sebagai  perkiraan  jumlah  individu  bakteri.Satuan  yang  digunakan,
umumnya per 100 mL atau per gram.Jadi misalnya terdapat nilai MPN 10/g
dalam  sebuah  sampel  air,  artinya  dalam  sampel  air  tersebut  diperkirakan
setidaknya mengandung 10 coliform pada setiap gramnya.Makin kecil nilai
MPN, maka air tersebut makin tinggi kualitasnya, dan makin layak minum.
Metode  MPN  memiliki  limit  kepercayaan  95  persen  sehingga  pada  setiap
nilai MPN, terdapat jangkauan nilai MPN terendah dan nilai MPN tertinggi
(FDA, 1989).
Tabel 1. Daftar MPN coliform (menggunakan 3 tabung)
Kombinasi/Jumlah tabung yang positif
MPN per gram/ml
1 : 10  1 : 100  1 : 1000
0
0
0
1
1
1
1
1
2
2
2
2
2
2
3
3
3
3
3
3
3
3
3
0
0
1
0
0
1
1
2
0
0
1
1
2
2
0
0
0
1
1
1
2
2
2
0
1
0
0
1
0
1
0
0
1
0
1
0
1
0
1
2
0
1
2
0
1
2
< 3
3
3
4
7
7
11
11
9
14
15
20
21
28
23
39
64
43
75
120
93
150
210
82
3
3
3
3
3
3
3
3
0
1
2
3
240
460
1 100
>2 400
Tabel 2. Daftar MPN Coliform menggunakan 5 tabung
Kombinasi/Jumlah
tabung positif
MPN/100 ml
Kombinasi/Jumlah
tabung positif
MPN/100 ml
0-0-0
0-0-1
0-1-0
0-2-0
1-0-0
1-0-1
1-1-0
1-1-1
1-2-0
2-0-0
2-0-1
2-1-0
2-1-1
2-2-0
2-3-0
3-0-0
3-0-1
3-1-0
3-1-1
3-2-0
3-2-1
4-0-0
4-0-1
4-1-0
4-1-1
4-1-2
< 2
2
2
4
2
4
4
6
6
4
7
7
9
9
12
8
11
11
14
14
17
13
17
17
21
26
4-2-0
4-2-1
4-3-0
4-3-1
4-4-0
5-0-0
5-0-1
5-0-2
5-1-0
5-1-1
5-1-2
5-2-0
5-2-1
5-2-2
5-3-0
5-3-1
5-3-2
5-3-3
5-4-0
5-4-1
5-4-2
5-4-3
5-4-4
5-5-0
5-5-1
5-5-2
5-5-3
5-5-4
5-5-5
22
26
27
33
34
23
30
40
30
50
60
50
70
90
80
110
140
170
130
170
220
280
350
240
300
500
900
1600
1600
83
84
Contoh soal:
Dari gambar diatas, berpakah nilai MPN coliform/100 ml?
Kombinasi atau jumlah tabung yang positif adalah 5-3-1.Beapakah jumlah
coliform dalam 100 ml sampel?
Jawab :
Nilai dalam tabel MPN untuk untuk kombinasi 5-3-1 adalah 110
Nilai MPN = Nilai MPN dari tabel x 1/pengenceran tabung tengah
= 110 x 1/10
-3
= 110000
Maka nilai MPN coliform/100 ml adalah 110000 MPN/ml
85
Dengan  menggunakan  metode  MPN  ini,  kita  mendapat  beberapa
keuntungan antara lain:
1)  Dapat dibuat sangat peka dengan penggunaan contoh lebih besar dari 1
ml/tabung
2)  Dapat  digunakan  di  lapangan  karena  media  dapat  disiapkan
sebelumnya
3)  Untuk tujuan tertentu dapat menggunakan media pertumbuhan selektif
sehingga hanya mikroba yang diharapkan dapat tumbuh baik
Kelemahan utama dari metode MPN adalah membutuhkan waktu dan biaya
yang  cukup  besar  untuk  persiapannya  karena  pada  prosedur  kerjanya
membutuhkan  ulangan  yang  cukup  banyak,  dapat  dilanjutkan   dengan
melakukan uji biokomia yaitu uji IMVIC.
c.  Identifikasi  Escherichia  coli  Menggunakan  Uji  IMVIC  (Indol  Metil
Voges-Proskauer Citrate)
Uji IMVIC terdiri dari uji indol, uji merah metil, uji  Voges-Proskauer, dan uji
sitrat.
1)  Uji Indol
Uji  IMVIC  diawali  dengan  uji  indol.  Adanya  Indol  akan  menyebabkan
amil alcoholberubah warnanya menjadi merah tua .E.colimenghasilkan
enzim tryptofanaseyang mengkatalisasikan penguraian gugus Indol dari
tryptofan. Dalam  media  biakan  ,  Indol  menumpuk  sebagai  produk
buangan  ,  sedangkan  bagian  lainnya  dari  molekul  tryptofan (  asam
piruvat  dan  NH4+  )  dapat  digunakan  untuk  memenuhi  kebutuhan  zat
hara  mikroorganisme.  Reagens  bereaksi  dengan  indol  dan
menghasilkan senyawa yang tidak larut dalam air dan berwarna merah
86
pada  permukaan  medium (Widyawati, 2012).Reaksi uji indol ini  dapat
digambarkan seperti dibawah ini.
CH
NH
2
COOH
N
H
N
H
CH
2
+
CH
3
C
COOH
O + NH
3
Tryptophanase
Tryptophan
Indole
Pyruvic
acid
N
H
+
Indole
Tahap 1
Tahap 2
N (CH
3
)
2
CHO
C N
+
(CH
3
)
2
HN
p-dimethylaminobenzaldehyde
quinoidal red-violet compound
HCl
Alcohol
Dehydration
reduction
Gambar  23. Reaksi Uji Indol
Prosedur kerja dalam uji indol menurut SNI 01-2897-1992 tentang Cara
uji cemaran mikroba adalah sebagai berikut:
  Dari  biakan  murniyang  ditumbuhkan  pada  agar,  ambil  satu  lop
biakan  tersebut  dengan  jarum  ose  dan  inokulasikan  pada  media
tryptone broth,
  Inkubasi pada suhu 35
0
C selama 18-24 jam
  Tambahkan  0,2  – 0,3  ml  pereaksi  indol  kedalam  masing-masing
tabung dan kocok selama 10 menit.
  Perhatikan perubahan yang terjadi pada tabung reaksi
87
Gambar  24. Reaksi Indol pada Uji Imvic
Uji  Indol  positif  ditandai  dengan  terbentuknya  cincin  yang  berwarna
merah muda di permukaan biakan apabila ditambahkan beberapa tetes
pereaksi indol yang terdiri dari p-dimetilaminobenzaldehid, butanol, dan
asam.  Uji  ini  menggunakan  media  Tryptone  Broth yang  mengandung
substrat  triptofan.  Reaksi  positif  terjadi  karena  triptofan dikonversi
menjadi indo
Amati gambar diatas! Terlihat adanya
perbedaan warna antara tabung
positif dan tabung negatif. Carilah
informasi apa yang menyebabkan
perbedaan warna tersebut!
Diskusikan dengan teman dan guru
anda
88
2)  Uji Metil Red (MR)
Tujuan  dari  uji  MR  ini  adalah  untuk  membedakan  antara  organisme
yang  mampu  mengubah  glukosa  menjadi  piruvat.  Uji  ini  akan
mendeteksi  bakteri  menggunakan  jalur  asam  campur,  jika  hasil  akhir
asam, maka tidak terjadi perubahan warna metil red (merah). Beberapa
bakteri  memfermentasi  glukosa  dan  menghasilkan  berbagai  produk
yang bersifat asam sehingga akan menurunkan pH media pertumbuhan
menjadi  5.0  atau  lebih  rendah.  Penambahan  indikator  metil  red  dapat
menunjukkan  adanya  perubahan  pH  menjadi  asam  .  Metil  Red
berwarna merah pada lingkungan dengan Ph 4.4 dan berwarna kuning
dengan  ph  6,2.  Uji  ini  sangat  berguna  dalam  identifikasi  kelompok
bacteri  yang  menempati  saluran  pencernaan. Reaksi  yang  terjadi  pada
uji metil red dapat digambarkan sebagai berikut:
Glucose + H
2O
Lactic acid
Acetic acid
Formic acid
CO
2+ H
2
(pH 4,4)
Methyl red indicator red color
Gambar  25. Reaksi kimia uji Metil Red
Prosedur kerja dari uji metil red berdasarkanSNI 01-2897-1992 tentang
Cara uji cemaran mikroba adalah sebagai berikut:
  Inokulasikan  1  lop  bakteri  dengan  menggunakan  jarum  ose  ke
dalam perbenihan MR-VP
  Inkubasikan  pada suhu 35
0
C selama 48 jam
  Tambahkan  5  ml  reagen  Methyl  Red kedalam  tabung  MR-VP
kemudian  Inkubasi  lagi  selama  72  jam  jadi  total  masa  inkubasi
adalah 120 jam atau 5 hari .
89
Gambar  26. Uji MR
Uji akan bersifatpositif bila kaldu berwarna merah setelah penambahan
reagens  Methyl  Red  dan  akan  bersifat  negatif  bila  kaldu  MR-VP
berubahan  warna  menjadi  kuning  atau  jingga  setelah  penambahan
reagens .
3)  Uji VP ( Voges Proskauer )
Uji Voges Proskueurdigunakan untuk mengidentifikasi mikroorganisme
yang  melakukan  fermentasi  dengan  hasil  akhir  2,3  butanadiol.  Bila
bakteri memfermentasikan karbohidrat menjadi 2,3 butanadiol sebagai
produk  utama,  akan  terjadi  penumpukan  bahan  tersebut  dalam  media
pertumbuhan.  Pada  uji  ini  dilakukan  penambahan  40%  KOH  dan  5%
larutan alphanaphtol pada saat pengamatan. Hal ini dapat menentukan
adanya  asetoin  (asetil  metil  karbinol),  suatu  senyawa  pemula  dalam
sintesis 2,3 butanadiol. Reaksi kimia uji VP  dapat digambarkan seperti
gambar dibawah ini:
90
C O
CH
CH
3
CH
3
OH
+
OH
40% KOH
Oxidation
C O
C
CH
3
CH
3
O
Diacetyl
+
C NH
NH
2
NH
R
Guanidine group
of peptone
alpha-naphthol
acetylmethylcarbinol
Glucose + O
2 Acetic acid 2,3-butanediol
acetylmethylcarbinol
CO
2
+ H
2
Tahap 1
Tahap 2
Gambar  27. Reaksi Uji VP
Prosedur kerja dari uji metil red berdasarkanSNI 01-2897-1992 tentang
Cara uji cemaran mikroba adalah sebagai berikut:
Bahan yang diperlukan
a. Kaldu MR-VP ( Methyl Red –Voges Proskauer
b. Larutan40% KOH
c. Larutan 5% alpha-naphtol
Cara Kerja
  Inokulasikan 1 lop biakan murni kedalam MRVP Broth.
  Inkubasikan selama 48 jam± 2 jam pada suhu 35
o
C +1
o
C.
  Pindahkan sebanyak 1 ml dari setiap MRVP Broth  yang tumbuh ke
tabung reaksi ukuran 13 mm x 100 mm steril dan tambahkan 0,6 ml
larutan alpha naphtol dan 0,2 ml 40 % KOH
  Kocok dan diamkan selama 2-4 jam.
91
Gambar  28. Uji VP pada IMVIC Test
Uji positifjika terbentuk warna merah muda eosin sampai merah delima
(ruby) seperti gambar dibawah ini. Uji bersifat Negatif bila kaldu MR-VP
tidak  memperlihatkan perubahan  warna  setelah  penambahan  reagens.
Perubahan warna ini disebabkan oleh adanya asetoin. Perubahan warna
ini  diperjelas  dengan  penambahan  larutan  alpha  naphtol.  Perubahan
warna  medium  biakan  lebih  jelas  pada  bagian  yang  berhubungan
dengan  udara  karena  2,3  butanadiol  dioksidasikan  kembali  menjadi
asetoin sehingga memperjelas hasil reaksi.
4)  Uji Sitrat
Uji  sitrat  digunakan  untuk  melihat  kemampuan  mikroorganisme
menggunakan  sitrat  sebagai  satu  satunya  sumber  karbon  dan  energi.
Untuk  uji  ini  dapat  digunakan  medium  sitrat  -Koser  ,  berupa  medium
cair  ,  atau  medium  simon  sitrat  berupa  medium  padat.  Simon  Citrat
Agar merupakan medium sintetik dengan Na sitrat sebagai satu satunya
92
sumber karbon, NH4+ sebagai sumber N dan bromthymol blue sebagai
indikator  pH,  sedangkan  medium  sitrat  koser  tidak  mengandung
indikator.
Bila  mikroorganisme  mampu  menggunakan  sitrat  ,  maka  asam  akan
perlahan  menghilang  dari  medium  biakan  ,  sehingga  menyebabkan
peningkatan pH dan mengubah warna medium dari hijau menjadi biru.
Perubahan  warna  dari  hijau  menjadi  biru  menunjukkan  bahwa
mikroorganisme  mampu  menggunakan  sitrat  sebagai  satu  satunya
sumber  karbon,  sedangkan  pada  medium  sitrat  koser  kemampuan
menggunakan  sitrat  ditunjukkan  oleh  kekeruhan  yang  menandakan
adanya pertumbuhan (Widyawati, 2012).
C
CH
2
CH
2
COOH HO
COOH
COOH
Citrase
C O
COOH
CH
2
COOH
+ CH3COOH C O
COOH
CH
3
+ CO
2
Citric acid
Oxalacetic
acid
Acetic
acid
Pyruvic
acid
Tahap 1
CO
2
+ 2Na
+
H
2
O Na
2
CO
3 Alkaline pH
Color change
from green to blue
+
Tahap 2
Gambar  29. Reaksi Kimia Uji Sitrat
Secara prosedur, uji sitrat adalah sebagai berikut:
Bahan yang diperlukan:
Biakan  : Escherichia coli
Media biakan : Simmons citrate agar
93
Cara kerja:
1.  Inokulasikan 1 lop biakan murni kedalam media Simmons Citrate.
2.  Inkubasikan pada suhu 35
0
C selama 48-96 jam.
Uji  sitrat  positif  ditunjukkan  oleh  perubahan  warna  biakan  dari  hijau
menjadi  biru  karena  terbentuknya  natrium  karbonat  hasil  reaksi
enzimatis yang mengubah indikator bromtimol biru pada media.
Gambar  30. Ujisitrat negatif
Escherichia  coli  dinyatakan  positif  apabila  uji  indol  dan  metil  merah
menunjukkan hasil positif, sedangkan uji Voges-Proskauerdan uji sitrat
menunjukkan hasil negatif. Jika salah satu interpretasi hasil tidak sesuai
maka biakan yang diuji dinyatakan tidak mengandung Escherichia coli.
Tabel 3. Sifat sifat bakteri Coliform dengan uji IMVIC
Indol  Methyl red  Voges Proskauer  Sitrat  Type
+
-+
--a+
+
-+
+
------+
+
+
+
----Typical E. coli
Atypical E. coli
Typical intermediate
Atypical intermediate
Typical E. aerogenes
Atypical E. aerogenes
Sumber : SNI 01-2897-1992 tentang Cara Uji Cemaran Mikroba
94
Dari tabel diatas, dapat disimpulkan apakah biakan yang didapat  E coli
atau bukan. Biakan dapat dinyatakan sebagai E coli jika termasuk dalam
Typical E. coli dan Atypical E. coli
3.  Tugas
a.  Uji  Kualitas  Mikrobiologi  Air  Berdasarkan  Nilai  Most  Probable  Number
(MPN) Coliform
Tujuan:
Praktikum ini bertujuan untuk mendeteksi adanya bakteri coliform dalam
sampel air minum
Alat:
1.  Botol contoh steril
2.  Cawan Petri steril
3.  Pipet ukur 10 ml dan 1 ml steril
Dari  hasil  membaca  pemaparan  diatas,  buatlah
kelompok diskusi dan diskusikan mengenai:
  Kelebihan dan kekurangan analisis pengujian
E. Coli dengan metode MPN dan IMVIC
  Hubungan antara jumlah E. Coli dengan
kulaitas produk
Hasil  diskusi  ini  selanjutnya  dipresentasikan
didepan kelas
95
4.  Pembakar Bunsen
5.  Inkubator
6.  Mikroskop
7.  Tabung reaksi
8.  Tabung Durham
9.  Vortex mixer
10.  Timbangan, Mortal dan pengerus
Bahan:
1.  Sampel air minum
2.  Aquades steril
3.  Media laktosa broth steril
4.  Media Briliant Green Bile Lactose Broth)
5.  Media EMB (Eosin Methylene Blue Agar) dan EA (sudah steril)
6.  Alkohol
7.  Kapas, karet, korek api
Langkah  Kerja:
1.  Uji Penduga
a.  Sediakan  100  ml  sampel  air  minum  yang  akan  diperiksa.  Siapkan
juga  3  buah  tabung  reaksi  berisi  9  ml  aquadessteril  dan  9  buah
tabung  reaksi  berisi  tabung  durham  terbalik  yang  telah  diisi  3  ml
media Lactose Broth.
b.  Secara aseptic, inokulasikan 1 ml sampel air minum ke dalam tabung
reaksi  berisi  9  ml  aquades  steril  lalu  kocoklah  tabung  tersebut
sehingga diperoleh pengenceran sebesar 10
-1
.
c.  Lakukan  pengenceran  dengan  cara  yang  sama  sehingga  diperoleh
pengenceran 10
-2
dan 10
-3
.
d.  Siapkan 9 tabung rekasi berisi media Lactose Broth dengan kode A1,
A2,  A3,  B1,  B2,  B3,  C1,  C2,  dan  C3.  Masukkan  1  ml  sampel  dengan
96
pengenceran 10
-1
ke dalam tabung A1, A2, A3. Masukkan 1 ml sampel
dengan pengenceran 10
-2
kedalam tabung B1, B2, dan B3. Masukkan 1
ml sampel dengan pengenceran 10
3
kedalam tabung C1, C2, dan C3.
e.  Inkubasi  semua  tabung  reaksi  pada  suhu  37
0
C  selama  1  x  24  jam.
Jika  timbul  gas  dalam  tabung  durham,  maka  uji  dilanjutkan  ke  uji
penegasan. Jika tidak ada  gas, inkubasi  lagi  selama  1 x 24 jam. Jika
tetap  tidak  ditemukangas  pada  tabung  durham,  maka  sampel  air
minum  tersebut  tidak  perlu  dilanjutkan  karena  tidak  terdapat
bakteri coliform didalam sampel tersebut.
2.  Uji Penegasan
a.  Lakukan pros inokulasi air minum yang menghasilkan gas pada tes
pendugaan.  Cara  kerja  pada  uji  penegasan,  sama  seperti  cara  kerja
pada uji penduga. Namun pada uji ini, media yang digunakan adalah
BGLBB (Brilliant Green Lactose Bile Broth).
b.  Inkubasi semua tabung dalam incubator pada suhu 44
0
C selama 1 x
24 jam. Jika terdapat gas pada tabung durham, berarti dalam sampel
air  minum  ini  mengandung  bakteri  Coliform  fekal.  Jika  tidak
ditemukan gas dalam tabung durham, lanjutkan inkubasi sampai 2 x
24  jam.  Untuk  mengetahui  nilai  MPN  bakteri  coliform  yang
terkandung  dalam  sampel  air  minum  tersebut,  kita  dapat
menghitungnya  menggunakan  rumus  dan  table  MPN.  Selain  itu,
tabung yang positif coliform fekal kita gores dalam media EMBA di
uji kepastian.
3.  Uji Kepastian
a.  Ambillah   1  ml  sampel  air  minum  yang  positif  coliform  pada
pengenceran 10
-1
, 10
-2
, dan 10
-3
. Lalu ambil satu lop biakan tersebut
dan goreskan pada media EMBA menggunakan jarum ose.
b.  Inkubasi pada suhu 37
0
Cselama 1 x 24 jam atau 2 x 24 jam.
c.  Perhatikan koloni bakteri yang tumbuh pada pemukaan medium 
97
b.  Identifikasi Bakteri Coliform Secara Biokimia Menggunakan Uji IMVIC
1.  Uji Indol
Bahan : Biakan murni Escherichia coli dalam media agar miring NA
Alat:
  Pembakar Bunsen atau spirtus
  Jarum ose
  Tabung uji
Cara Kerja
a.  Indol
  Dari  biakan  murni  e  coli dalam  media  agar  miring  NA,
inokulasikan 1 lop biakan kedalam tryptone broth.
  Inkubasi pada suhu 36
0
C selama 18-24 jam
  Tambahkan  0,2  -0,3  ml  pereaksi  indol  kedalam  masing-masing
tabung dankocok selama 10 menit.
  Akan  muncul  perubahan  warna  pada  permukaan.   Amati  dan
diskusikan dengan teman anda
b.  Uji Metil Merah
  Dari  biakan  murni  e  coli dalam  media  agar  miring  NA,
inokulasikan 1 lop biakan ke dalam perbenihan MR-VP.
  Inkubasikan suhu 35-37
0
C selama 48 jam.
  Dengan  menggunakan  pipet,  pindahkan  5  ml  ke  dalam  tabung
reaksi.
  Tambahkan 5 tetes metil merah ke dalam tabung reaksi tersebut
dan kocok
  Amati  perubahan  warna  yang  terjadi  dan  diskusikan  dengan
teman anda
98
c.  Uji VP (Voges Proskauer)
  Dari  biakan  murni  e  coli  dalam  media  agar  miring  NA,
inokulasikan 1 lop biakan ke dalam perbenihan MR-VP.
  Inkubasi pada suhu 37
0
C selama 48 jam.
  Dengan menggunakan pipet, pindahkan 1 ml suspense kedalam
tabung reaksi dan tambahkan 0,6 ml larutan alfa naftol dan 0,2
ml larutan kalium hidroksida, lalu kocok.
  Diamkan selama 2-4 jam, amati perubahan warna yang terjadi.
d.   Uji Sitrat
  Dari  biakan  murni  e  coli dalam  media  agar  miring  NA,
inokulasikan  1  lop  biakan  ke  dalam  perbenihan  Simmons
Citrate atau Koser’s Citrate.
  Inkubasi pada suhu 35
0
C selama 48-96 jam
  Amati perubahan warna yang terjadi
Dari pengujian IMVIC yng telah
dilakukan diatas, amati dan
diskusikanlah perubahan warna yang
terjadi dan penyebab perubahan
warna tersebut. Buatlah laporan dan
presentasikan didepan kelas
99
4.  Refleksi
Petunjuk
1.  Tuliskan nama dan KD yang telah anda selesaikan pada lembar tersebut!
2.  Tuliskan jawaban pada pertanyaan pada lembar refleksi
3.  Kumpulkan hasil refleksi pada guru anda
LEMBAR REFLEKSI
1.  Bagaimana kesan anda setelah mengikuti pembelajaran ini?
............................................................................................................................. ........................
.................................................................................. ...................................................................
2.  Apakah anda telah menguasai seluruh materi pembelajaran ini? Jika
ada materi yang belum dikuasai tulis materi apa saja.
................................................................... ..................................................................................
............................................................................................................................. ........................
3.  Manfaat apa yang anda peroleh setelah menyelesaikan pelajaran ini?
............................................................................................................................. ..........................
............................................................. ..........................................................................................
4.  Apa yang akan anda lakuan setelah menyelesaikan pelajaran ini?
............................................................................................................................. ..........................
......................................................................................................... ..............................................
5.  Tuliskan secara ringkas apa yang telah anda pelajari pada kegiatan
pembelajaran ini!
........................................................................................................................... ............................
............................................................................................................................. ..........................
100
Lembar Pembelajaran
1.  Jelaskan tentang berbagai media selektif yang digunakan untuk identifikasi e coli
2.  Jelaskan  perbedaan  antara  metode  MPN  dan  metode  IMVIC  dalam  identifikasi
bakteri e coli
3.  Jelaskan tahapan-tahapan identifikasi bakteri dengan metode MPN
4.  Jelaskan tahan-tahapan identifikasi bakteri e colidengan metode IMVIC
5.  Jelaskan kelebihan dan kelemahan dari metode MPN dan metode IMVI
C.  Penilaian
1.   Penilaian Sikap
Indikator
Penilaian
Teknik  Bentuk
Instrumen
Butir Soal/Instrumen
Sikap
2.1
  Menampilkan
perilaku rasa
ingin tahu
dalam
melakukan
observasi
  Menampilkan
perilaku
obyektif
dalam
kegiatan
observasi
  Menampilkan
perilaku jujur
dalam
melaksanaka
n kegiatan
observasi
2.2 Mengom
promikan
Non Tes
Non Tes
Lembar
Observasi
Penilaian
sikap
Lembar
Observasi
1.  Rubrik Penilaian Sikap
No  Aspek
Penilaian
4  3  2  1
1  Menanya      
2  Mengamati      
3  Menalar      
4  Mengolah data      
5  Menyimpulkan       
6  Menyajikan      
Kriteria Terlampir
2.  Rubrik Penilaian Diskusi
101
Indikator
Penilaian
Teknik  Bentuk
Instrumen
Butir Soal/Instrumen
hasil
observasi
kelompok
  Menampilkan
hasil kerja
kelompok
  Melaporkan
hasil diskusi
kelompok
2.3
Menyumbang
pendapat
tentang  bahan
baku  atau
media  untuk
pembuatan
produk
makanan/
minuman/
bahan industri
Non Tes
Penilaian
sikap
Lembar
Observasi
Penilaian
sikap
No  Aspek
Penilaian
4  3  2  1
1  Terlibat penuh      
2  Bertanya      
3  Menjawab      
4  Memberikan
gagasan orisinil
5  Kerja sama       
6  Tertib
3.  Rubrik Penilaian Presentasi
No  Aspek
Penilaian
4  3  2  1
1  Kejelasan
Presentasi
2  Pengetahuan       
3  Penampilan     
Pengetahuan
1.Mengetahui
prinsip dan
konsep
identifikasi e
coli
2. Mengetahui
cara kerja
metode MPN
dan IMVIC
dalam
pemeriksaan
e coli
Tes Uraian 1.  Jelaskan  tentang  berbagai  media
selektif  yang  digunakan  untuk
identifikasi e coli
2.  Jelaskan  perbedaan  antara  metode
MPN  dan  metode  IMVIC  dalam
identifikasi bakteri e coli
3.  Jelaskan  tahapan-tahapan  identifikasi
bakteri dengan metode MPN
4.  Jelaskan  tahan-tahapan  identifikasi
bakteri e coli dengan metode IMVIC
5.  Jelaskan  kelebihan  dan  kelemahan
dari metode MPN dan metode IMVIC
102
Indikator
Penilaian
Teknik  Bentuk
Instrumen
Butir Soal/Instrumen
Keterampilan
1.   Melakukan
praktek
identifikasi
bakteri e coli
dengan
metode MPN
dengan
terampil dan
cermat
2.   Melakukan
praktek
identifikasi
bakteri  e  coli
dengan
metode
imvic
3. Mempresentasikan hasil
didepan
kelas
Non Tes
(Tes
Unjuk
Kerja)
1.  Rubrik Sikap Ilmiah
No  Aspek
Penilaian
4  3  2  1
1  Menanya      
2  Mengamati      
3  Menalar      
4  Mengolah data      
5  Menyimpulkan       
6  Menyajikan    
2.  Rubrik Penilaian Prosedur pengolahan
Aspek
Penilaiaan
4  3  2  1
Cara melakukan
proses pengolahan
Cara menuliskan
data hasil
pengamatan
Kebersihan dan
penataan alat
103
Lampiran Rubrik & Kriteria Penilaian :
a. Rubrik Sikap Ilmiah
Kriteria
1. Aspek menanya:
Skor 4   Jika   pertanyaan  yang  diajukan  sesuai  dengan  permasalahan  yang
sedang dibahas
Skor 3  Jika pertanyaan yang diajukan  cukup  sesua dengan permasalahan
yang sedang dibahas
Skor 2  Jika pertanyaan yang diajukan  kurang sesuai  dengan permasalahan
yang sedang dibahas
Skor 1   Tidak menanya
2. Aspek mengamati :
Skor 4   Terlibat dalam pengamatan dan aktif dalam memberikan pendapat
Skor 3  Terlibat dalam pengamatan
Skor 2  Berusaha terlibat dalam pengamatan
Skor 1  Diam tidak aktif
3.Aspek menalar
Skor 4   Jika nalarnya benar
Skor 3  Jika nalarnya hanya sebagian yang benar
Skor 2  Mencoba bernalar walau masih salah
Skor 1  Diam tidak menalar
No  Aspek
Skor
4  3  2  1
1  Menanya      
2  Mengamati      
3  Menalar      
4  Mengolah data      
5  Menyimpulkan      
6  Menyajikan        
104
4.Aspek mengolah data :
Skor 4   Jika Hasil Pengolahan data benar semua
Skor 3  Jika hasil pengolahan data sebagian besar benar
Skor 2  Jika hasil pengolahan data sebagian kecil benar
Skor 1  Jika hasil pengolahan data salah semua
5.Aspek menyimpulkan :
Skor 4   jika kesimpulan yang dibuat seluruhnya benar
Skor 3  jika kesimpulan yang dibuat seluruhnya benar
Skor 2  kesimpulan yang dibuat sebagian kecil benar
Skor 1  Jika kesimpulan yang dibuat seluruhnya salah
6.Aspek menyajikan
Skor 4   jika   laporan  disajikan  secara   baik  dan  dapat  menjawabsemua
pertanyaan dengan benar
Skor 3  Jika laporan disajikan secara baik dan hanya dapat menjawab sebagian
pertanyaan
Skor 2  Jika  laporan  disajikan  secara  cukup  baik  dan  hanya  sebagian  kecil
pertanyaan yang dapat di jawab
Skor 1  Jika  laporan  disajikan  secara  kurang   baik  dan  tidak  dapat  menja wab
pertanyaan
b. Rubrik Penilaian Diskusi
No  Aspek
Penilaian
4  3  2  1
1  Terlibat penuh      
2  Bertanya      
3  Menjawab      
4  Memberikan gagasan orisinil      
5  Kerja sama      
6  Tertib        
105
Kriteria
1.Aspek Terlibat penuh :
Skor 4   Dalam  diskusi  kelompok  terlihat  aktif,  tanggung  jawab,
mempunyai pemikiran/ide, berani berpendapat
Skor 3   Dalam  diskusi  kelompok  terlihat  aktif,  dan  berani
berpendapat
Skor 2   Dalam diskusi kelompok kadang-kadang berpendapat
Skor 1   Diam sama sekali tidak terlibat
2. Aspek bertanya :
Skor 4   Memberikan pertanyaan dalam kelompok dengan bahasa yang jelas
Skor 3   Memberikan pertanyaan dalam kelompok dengan bahasa yang kurang
jelas
Skor 2   Kadang-kadang memberikan pertanyaan
Skor 1   Diam sama sekali tdak bertanya
3. Aspek Menjawab :
Skor 4   Memberikan  jawaban  dari  pertanyaan  dalam  kelompok  dengan  bahasa  yang
jelas
Skor 3   Memberikan  jawaban  dari  pertanyaan  dalam  kelompok  dengan  bahasa  yang
kurang jelas
Skor 2   Kadang-kadang memberikan jawaban dari pertanyaan kelompoknya
Skor 1   Diam tidak pernah menjawab pertanyaan
4. Aspek Memberikan gagasan orisinil :
Skor 4   Memberikan  gagasan/ide  yang  orisinil  berdasarkan  pemikiran
sendiri
Skor 3   Memberikan gagasan/ide yang didapat dari buku bacaan
Skor   2   Kadang-kadang memberikan gagasan/ide
Skor 1   Diam tidak pernah memberikan gagasan
106
5. Aspek Kerjasama :
Skor 4   Dalam  diskusi  kelompok  terlibat  aktif,  tanggung  jawab  dalam
tugas,  dan  membuat  teman-temannya  nyaman  dengan
keberadaannya
Skor 3   Dalam  diskusi  kelompok  terlibat  aktif  tapi  kadang-kadang
membuat  teman-temannya  kurang  nyaman  dengan
keberadaannya
Skor 2   Dalam diskusi kelompok kurang terlibat aktif
Skor 1   Diam tidak aktif
6. Aspek Tertib :
Skor 4   Dalam  diskusi  kelompok  aktif,  santun,  sabar  mendengarkan
pendapat teman-temannya
Skor 3   Dalam diskusi kelompok tampak aktif,tapi kurang santun
Skor 2   Dalam diskusi kelompok suka menyela pendapat orang lain
Skor 1   Selama terjadi diskusi sibuk sendiri dengan cara berjalan kesana
kemari
c. Rublik Penilaian Penggunaan Alat / bahan
Aspek
Skor
4  3  2  1
Cara merangkai alat      
Cara menuliskan data hasil
pengamatan
Kebersihan dan penataan alat    
Kritera :
1. Cara merangkai alat :
Skor 4 : jika seluruh peralatan dirangkai sesuai dengan prosedur
Skor 3 : jika sebagian besar peralatan dirangkai sesuai dengan prosedur
Skor 2 : jika sebagian kecil peralatan dirangkai sesuai dengan prosedur
Skor 1 : jika peralatan tidak dirangkai sesuai dengan prosedur
107
2. Cara menuliskan data hasil pengamatan :
Skor 4 : jika seluruh data hasil pengamatan dapat dituliskan dengan benar
Skor 3:  jika  sebagian  besar  data  hasil  pengamatan  dapat  dituliskan  dengan
benar
Skor :  jika   sebagian  kecil  data  hasil  pengamatan  dapat  dituliskan  dengan
benar
Skor 1 : jika tidak ada data hasil pengamatan yang dapat dituliskan dengan
benar
3. Kebersihan dan penataan alat
Skor 4 : jika seluruh alat dibersihkan dan ditata kembali dengan benar
Skor 3 : jika sebagian besar alat dibersihkan dan ditata kembali dengan benar
Skor 2 :jika sebagian kecil alat dibersihkan dan ditata kembali dengan benar
Skor 1 : jika tidak ada hasil alat dibersihkan dan ditata kembali dengan benar
d. Rubrik Presentasi
Kriteria
1. Kejelasan presentasi
Skor 4   Sistematika  penjelasan  logis  dengan   bahasa  dan  suara  yang
sangat jelas
Skor 3  Sistematika penjelasan logis dan bahasa sangat jelas tetapi suara
kurang jelas
Skor 2  Sistematika penjelasan tidak logis meskipun menggunakan bahasa
dan suara cukup jelas
Skor 1  Sistematika penjelasan tidak logis meskipun menggunakan bahasa
dan suara cukup jelas
No  Aspek  Penilaian
4  3  2  1
1  Kejelasan Presentasi      
2  Pengetahuan       
3  Penampilan         
108
2.  Pengetahuan
Skor 4   Menguasai  materi  presentasi  dan  dapat  menjawab  pertanyaan
dengan baik dan kesimpulan mendukung topik yang dibahas
Skor 3  Menguasai  materi  presentasi  dan  dapat  menjawab  pertanyaan
dengan baik dan kesimpulan mendukung topik yang dibahas
Skor 2  Penguasaan  materi  kurang  meskipun  bisa  menjawab  seluruh
pertanyaan dan kesimpulan tidak berhubungan dengan topik yang
dibahas
Skor 1  Materi  kurang  dikuasai  serta  tidak  bisa  menjawab  seluruh
pertanyaan dan kesimpulan tidak mendukung topik
3.  Penampilan
Skor 4   Penampilan  menarik,  sopan  dan  rapi,  dengan  penuh  percaya  diri
serta menggunakan alat bantu
Skor 3  Penampilan  cukup  menarik,  sopan,  rapih  dan  percaya  diri
menggunakan alat bantu
Skor 2  Penampilan kurang menarik, sopan, rapi tetapi kurang percaya diri
serta menggunakan alat bantu
Skor 1  Penampilan  kurang  menarik,  sopan,  rapi  tetapi  tidak  percaya  diri
dan tidak menggunakan alat bantu
109
Penilaian Hasil Observasi
No  Aspek
Skor
4  3  2  1
1
Sistematika
Laporan
Sistematika
laporan
mengandung
tujuan,
masalah,
hipotesis,
prosedur,  hasil
pengamatan
dan
kesimpulan.
Sistematika
laporan
mengandung
tujuan,  ,
masalah,
hipotesis
prosedur,  hasil
pengamatan
dan
kesimpulan
Sistematika
laporan
mengandung
tujuan,
masalah,
prosedur  hasil
pengamatan
dan
kesimpulan
Sistematika
laporan  hanya
mengandung
tujuan,  hasil
pengamatan
dan
kesimpulan
2
Data
Pengamatan
Data
pengamatan
ditampilkan
dalam  bentuk
table,  grafik
dan  gambar
yang  disertai
dengan
bagian-bagian
dari  gambar
yang lengkap
Data
pengamatan
ditampilkan
dalam  bentuk
table,  gambar
yang  disertai
dengan
beberapa
bagian-bagian
dari gambar
Data
pengamatan
ditampilkan
dalam  bentuk
table,  gambar
yang  disertai
dengan  bagian
yang  tidak
lengkap
Data
pengamatan
ditampilkan
dalam  bentuk
gambar  yang
tidak  disertai
dengan
bagian-bagian
dari gambar
3
Analisis  dan
kesimpulan
Analisis  dan
kesimpulan
tepat  dan
relevan
dengan   datadata  hasil
pengamatan
Analisis  dan
kesimpulan
dikembangkan
berdasarkan
data-data  hasil
pengamatan
Analisis  dan
kesimpulan
dikembangkan
berdasarkan
data-data  hasil
pengamatan
tetapi  tidak
relevan
Analisis  dan
kesimpulan
tidak
dikembangkan
berdasarkan
data-data  hasil
pengamatan
4
Kerapihan
Laporan
Laporan ditulis
sangat   rapih,
mudah  dibaca
dan  disertai
dengan  data
kelompok
Laporan ditulis
rapih,  mudah
dibaca  dan
tidak   disertai
dengan  data
kelompok
Laporan ditulis
rapih,  susah
dibaca  dan
tidak  disertai
dengan  data
kelompok
Laporan ditulis
tidak  rapih,
sukar   dibaca
dan  disertai
dengan  data
kelompok
110
Kegiatan pembelajaran 4. Pemeriksaan Salmonella padaBahan Pangan
A.  Deskripsi
Uji Salmonella digunakan  untuk  menetapkan  adanyaSalmonella dalam  makanan.
Salmonella merupakan  bakteri  gram-negatif  berbentuk  tongkat  yang
menyebabkan  tifus,  paratifus,  dan  penyakit  foodborne. Salmonella terdiri  dari
sekitar  2500  serotipe  yang  kesemuanya  diketahui  bersifat  pathogen  baik  pada
manusia atau hewan.
Bakteri  ini  bukan  merupakan  indikator  sanitasi,  melainkan  bakteri  indikator
keamanan  pangan  .  Artinya,  karena  semua  serotipe Salmonella yang  diketahui  di
dunia  ini  bersifat  patogen  maka  adanya  bakteri  ini  dalam  makanan  dianggap
membahayakan kesehatan. Oleh karena itu berbagai standar makanan siap santap
mensyaratkan tidak ada Salmonella dalam 25 gram sampel makanan.
B.  KegiatanBelajar
1.  Tujuan Pembelajaran
Setelah melakukan kegiatan belajar ini, diharapkan siswa dapat:
a.  Menerapkan  konsep  dan  prinsip  cara  pelaporan  hasil  pemeriksaan
Salmonellapada bahan pangan
b.  Melakukan pemeriksaan Salmonellapada bahan pangan
2.  Uraian Materi
a.  Salmonella
Salmonella merupakan  salah  satu  bakteri  yang  sering  menyebabkan
penyakit yang serius apabila mencemari makanan maupun minuman yang
dikonsumsi  manusia.  Salmonella juga  dapat  hidup  pada  tubuh  makhluk
111
hidup  yang  berdarah  dingin  maupun  berdarah  panas.  Bakteri  ini  bukan
indikator sanitasi, melainkan bakteri indikator keamanan pangan . Artinya,
karena  semua  serotipe  Salmonellayang  diketahui  di  dunia  ini  bersifat
patogen maka adanya bakteri ini dalam makanan dianggap membahayakan
kesehatan.  Oleh  karena  itu  berbagai  standar  makanan  siap  santap
mensyaratkan tidak ada Salmonelladalam 25 gram sampel makanan.
Secara  morfologi,  bakteri  Salmonella mempunyai  karakteristik  gram
negatif, berbentuk batangdiameter 0,7 – 1,5 μm, memiliki panjang 2 – 5 μm,
tidak  membentuk  spora,  dan  bersifat  aerob/fakultatif  aerob.Salmonella
memiliki  kekerabatan  yang  dekat  dengan  bakteri  genus  Escherichia  dan
dapat dijumpai hampir di seluruh dunia.
Berikut adalah klasifikasi dari Bakteri Salmonella:
Phylum/Divisi  :   Protophyta
Kelas   :  Schizomycetes
Ordo   :  Enterobacteriales
Keluarga     :   Enterobacteriaceae
Genus   :   Salmonella
Species    :  S. enterica
Salmonella dapat  memfermentasi  glukosa  dengan  membentuk  asam  atau
gas  dan  dapat  mereduksi  nitrat  menjadi  nitrit.  Salmonella mudah  tumbuh
pada  kebanyakan  media.  Namun  ada  empat  jenis  media  spesifik  yang
digunakan untuk memilah Salmonelladari mikroba lainnya,yaitu :
1)  Media agar Bismuth Sulfite
Media  ini  merupakan  media  yang  sangat  spesifik  untuk  isolasi
Salmonella  typhii dan spesies  lain. Adanya  bismuth sulfite dan  brilliant
green dapat  menghambat  pertumbuhan  gram  positif  dan  koliform.
Adanya  Sulfit  dalam  media  akan  diubah  menjadi  H2S  yang  berperan
112
dalam  mengendapkan  besi,  sehingga  koloni  berwarna  coklat  hitam
dengan kilap logam. Media ini sangat cocok digunakan pada tahap awal
untuk  memilahkan  Salmonella dari  mikroba  lain.  Sedangkan  mikroba
lain  yang  tumbuh  terutama  Pseudomonas  dapat  dipilah  dengan  media
lain.
Gambar  31.  Salmonella typhii dalam media Bismuth Sulfit Agar
2)  Media Brilliant Green Agar
Media  ini  mengandung  brillian  green yang  sangat  baik  untuk
menghambatpertumbuhan  e  coli dan  bakteri  yang  memfermentasi
sukrosa  dan  laktosa.  Garam  empedu  berperan  menghambat  bakteri
untuk  batang  gram  negatif.  Media  ini  sangat  selektif  untuk  isolasi
Salmonella sp.  Salmonellatyphii  akan  berwarna  merah  dikelilingi  zona
merah.  Bakteri  lain  yang  akan  menyerupai  Salmonella adalah  bakteri
Pseudomonas.  Untuk  menetapkan  apakah  itu  Salmonella atau
Pseudomonas, diperlukan konfirmasi dengan media lain.
113
Gambar  32. Salmonella typhii dalam media Brillian Green Agar
3)  Media Xylose-Lysine-Desoxycholate Agar
Media  ini  digunakan  untuk  isolasi  Salmonella dan  memilah  organisme
lain  dengan  cara  memfermentasi  xylose,  dekarboksilasi  lysine  dan
produksi  H2S.  fermentasi  xylose  sangat  lazim  bagi  kebanyakan
organisme  enteric  kecuali  Shigella,  Provindencia,  dan  Edwardsiella.
Pada media ini,  Salmonellaakan membentuk koloni merah dengan inti
hitam,  sedangkan  Pseudomonas  tumbuh  dengan  warna  merah  dan
Eschericia  berwarna  kuning.  Mikroba  lain  yang  dapat  tumbuh  pada
media  ini  antara  lain  Arizona,  Proteus,  Aerobacter,  Klebsiella,  dan
Citrobacter. Namun, media ini kurang tepat jika  digunakan pada  tahap
awal  identifikasi  Salmonela,  sehingga  media  ini  lebih  baik  digunakan
untuk tahap konfirmasi kontaminan Salmonella.
114
Gambar  33. Media Xylose-Lysine-Desoxycholate Agar (kiri) dan
Media Xylose-Lysine-Desoxycholate Agar yang ditumbuhi
Salmonella
4)  Triple Sugar Iron Agar
Triple  Sugar  Iron  Agar  merupakan  media  diferensial  yang  terdiri  dari
laktosa,  sukrosa,  dekstrosa,  fero  sulfat,  dan  indicator  pH  phenol  red.
Media  ini  digunakan  untuk  memilah  mikroorganisme  yang  memiliki
kemampuan  untuk  mendegradasi  sulfur  dan  memfermentasi
karbohidrat.  Dengan  adanya  fermentasi  phenol  red,  jika
mikroorganisme tidak dapat memfermentasi ketiga jenis gula (sukrosa,
laktosa,  glukosa)  yang  ada  dalam  media,  maka  media  akan  berubah
menjadi  warna  kuning.  Jika  mikroorganisme  hanya  dapat
memfermentasi dekstrosa, sebagian kecil dekstrosa yang tersisa dalam
media  digunakan  oleh  mikroorganisme  dalam  10  jam  pertama  proses
inkubasi.  Terjadinya  fermentasi  dekstrosa  oleh  Salmonella akan
menurunkan  pH  menjadi  asam.  Kondisi  ini  akan  menyebabkan
perubahan phenol red (media merah) menjadi kuning.
115
Gambar  34. Salmonella Typhimurium dalam Media TSIA
http://www.austincc.edu/microbugz/triple_sugar_iron_agar.php
5)  Hektoen Enteric Agar merupakan media selektif diferensial.
Media ini  terdiri dari  bile  salt agar yang berfungsi untuk  menghambat
pertumbuhan  bakteri  gram  positif,  sehingga  diharapkan  hanya
Salmonella yang  tumbuh  pada  media  ini.  Media  ini  juga  digolongkan
sebagai  media  diferensial  karena  dapat  membedakan  bakteri
Salmonella  dengan  bakteri  lainnya  dengan  cara  memberikan  tiga  jenis
karbohidrat  pada  media,  yaitu  laktosa  dengan  komposisi  tertinggi,
glukosa,  dan  salisin.  Salmonella  tidak  dapat  memfermentasi  laktosa
sehingga asam yang dihasilkan sedikit karena fermentasi hanya berasal
116
dari  glukosa.  Hal  ini  yang  menyebabkan  Salmonella  berwarna  hijau
kebiruan karena asam yang dihasilkan bereaksi dengan indicator yang
ada pada media yaitu fuksin asam dan bromtimol blue.
Gambar  35. Media Hektoen Enteric Agar (kiri) dan Salmonella
dalam media Hektoen Enteric Agar
Pada  gambar  tersebut  dapat  kita  lihat  bahwa  media  yang  ditumbuhi
Salmonella  terdapat  titik  hita  pada  koloni  bening  Salmonella.  Titik
hitam  tersebut  merupakan  hasil  dari  fermentasi  karbohidrat  berupa
H2S.  Seluruh  spesies  akan  menunjukkan  hasil  yang  serupa  kecuali
Salmonella typhii yang memproduksi H2S dalam jumlah yang sedikit.
b.  Prosedur Uji Salmonella
Untuk melakukan  deteksi cemaran  Salmonella pada  produk makanan, ada
beberapa  metoda  yang  direkomendasikan  untuk  digunakan  oleh  industri
maupun  laboratorium  analisa  lainnya.  Salah  satunya  adalah  metoda  yang
diterbitkan oleh Badan Standarisasi Internasional, yaitu  Standar ISO 6579
:  2002  Microbiology  of  food  and  animal  feeding  stuffs  -- Horizontal
method for the detection of Salmonellaspp.
117
Gambar  36. Metoda ISO 6579:2002 untuk Deteksi Salmonella
Sumber.http://www.merckmillipore.co.id/chemicals/analisis-bakteri
salmonella-menggunakan-media-kultur-bismuth-sulphiteagar/c_.hWb.s1O7pYAAAEkiloksZ5a
Dalam  metoda  ISO  6579  :  2002  ini  terdiri  dalam  tiga  tahapan,  tahap
pertama  adalah  pre-enrichment,  tahap  kedua  adalah  selective  enrichment,
dan  tahap  ketiga  adalah  isolasi  pada  media  agar  selektif.  Tahap  preenrichment menggunakan  media  kultur  cair  yaitu  Buffered  Peptone  Water
(BPW).  Pre-enrichment pada  media  kultur  cair  berfungsi  untuk
memperbaiki  kondisi  bakteri  yang  injured.Tahapan  kedua  adalah
melakukan  selective  enrichment pada  2  jenis  media  kultur  cair,  yaitu
Rappaport  Vassiliadis  Salmonella  Enrichment  Broth (RVS)  dan  Muller
Kaufman  Tetrathionate  Novobiocin  Broth.   Pada  tahapan  selective
enrichment ini  terjadi  optimalisasi  pertumbuhan  Salmonella dan
dihambatnya  pertumbuhan  bakteri-bakteri  penyerta  lainnya  yang  dapat
menggangu  pertumbuhan  Salmonella,  sehingga  dapat  semakin
meminimalkan  hasil  false negatif.  Tahap  ini  menggunakan  2  jenis  media
selektif yang bertujuan untuk memaksimalkan pertumbuhan dari berbagai
118
spesies  Salmonella yang mungkin terdapat pada  sampel. Sebab, terkadang
beberapa  jenis  spesies  Salmonella dapat  tumbuh  baik  pada  media  kultur
RVSnamun tidak dapat tumbuh pada MKTTn, maupun sebaliknya.
Tahapan  ketiga  adalah  melakukan  isolasi   atau  plating  pada  media  agar
selektif  yaitu  XLD  agardan  Rambach  Agardengan  metoda  streak/gores
menggunakan  jarumose.  Pada  media  XLD  agar,  Salmonella  akan
menggunakan  kandungan  xylose,  laktosa,  dan  sukrosa  menjadi  zat  asam
yang  menyebabkan  phenol  red  berubah  menjadi  kekuningan  atau  oranye.
Salmonella  juga  akan  menghasilkan  hydrogen  sulfit  sebagai  hasil  dari
pemanfaatan  thiosulfate  dan  garam  besi  (III)  yang  menyebabkan  koloni
Salmonella berwarna hitam.
Gambar  37. XLD agar (kiri) dan Koloni Salmonella dalam XLD agar
(kanan)
Sumber.http://pictures.life.ku.dk/atlas/microatlas/veterinary/plating_media/XLD
Pada  media  Rambach  Agar,  Salmonella  akan  tumbuh  dan  tampak  sebagai
koloni  berwarna  merah.  Hal  ini  disebabkan  oleh  pemanfaatan  propylene
glycoldan reaksinya dengan pH indikator yang menghasilkan warna merah.
Media Rambach Agarmengandung substrat chromogenicuntuk mendeteksi
aktifitas  pemecahan  β-galactosidase oleh  Coliform,  sehingga  dapat
dibedakan  antara  Salmonella  dengan  bakteri  Coliform  lainnya.
119
Pertumbuhan  coliform pada  media  Rambach  Agar akan  tampak  sebagai
koloni  yang  berwarna  kehijauan  atau  biru-violet.  Sedangkan  bakteri  dari
kelompok  Gram-negatif  lainnya  akan  tampak  sebagai  koloni  yang  tak
berwarna, misalnya Proteus dan Shigella.
Gambar  38. Koloni Salmonella pada Rambach agar (kiri) dan koloni e
coli pada rambach agar (kanan)
Contoh  lain  dalam   pengujian  Salmonella  adalah  identifikasi  Salmonella
pada sampel mayonnaise pada (SNI 01-4473-1998) dengan syarat negative
jika jumlah koloni 25 gr.
Prosedur  pengujian  deteksi  Salmonellasesuai  dengan  SN-01-2332.2-2006
tentang  Tahap-Tahap  Uji  Salmonella.  Tahap  uji  ini  terbagi  menjadi
beberapa tahap, yaitu
1)  Pra-Pengkayaan
Metode ini diawali dengan pengambilan sampel seberat 25 gr atau 225
ml  dengan  perbandingan  1  :  9  untuk  sampel  dan  media  pengkayaan
(lactose  broth).  Selanjutnya  contoh  yang  akan  diuji  dimasukkan  ke
dalam  wadah  plastik  yang  telah  disterilkan  dan  ditambahkan  225  ml
larutan  Lactose  Broth  (LB).  Selanjutkan  homogenkan  sampel  selama 2
120
menit untuk dianalisa. Secara aseptis, pindahkan larutan contoh dalam
wadah steril yang sesuai. Inkubasi 24 jam ± 2 jam pada suhu 35°C ± 1°C.
Lanjutkan pengujian sesuai dengan prosedur.
Gambar  39. Sebelum dan Sesudah Proses Pra-Pengkayaan
Silahkan  anda  amati  gambar  proses  sebelum  dan  sesudah  proses
pengkayaan.  Diskusikanlah  dengan  teman  kelompok  anda,  apa  yang
menyebabkan  perubahan  warna.  Reaksi  apa  yang  terjadi  pada  proses
tersebut.
2)  Tahap Pengkayaan
Tahap  pengkayaan  diawali  dengan  mengencangkan  tutup  wadah  dan
mengkocok perlahan contoh yang diinkubasi. Untuk produk perikanan
dengan  tingkat  kontaminasi  tinggi,  Selanjutnya  pindahkan  0,1  ml
larutan contoh ke dalam 10 ml Rappaport-Vassiliadis (RV) medium dan 1
ml  larutan  contoh  ke  dalam  10  ml  Tetrathionate  Broth  (TTB);  Untuk
jenis  produk  perikanan  lain,  pindahkan  1  ml  larutan  contoh  ke  dalam
masing-masing 10 ml SCB dan 10 ml TTB
Inkubasi media pengkayaan selektif sebagai berikut:
inkubasi pada RV  medium selama 24 jam± 2 jam pada suhu 42°C ± 0,2°C
(Water bath);
121
Inkubasi  pada  TTB  selama  24  jam  ±  2  jampada  suhu  43°C  ±  0,2°C
(Water bath);
inkubasi pada TTB dan SCB selama 24 jam ± 2 jam pada suhu 35°C ± 1°C
(Inkubator).
Gambar  40. Isolasi bakteri dari media pra-pengkayaanke media
pengkayaan
3)  Tahap Inkubasi
Tahap ini diawali dengan mengocok tabung (dengan vortex) dan dengan
mengggunakan  jarum  ose  (3mm) gores  TTB  yang diinkubasi ke dalam
media  HE,  XLD  dan  BSA.  Siapkan  BSA  sehari  sebelum  digunakan  dan
simpan  di  tempat  gelap  pada  suhu  ruang.  Gores  ke  dalam  media  yang
sama dari RV  Broth atau SCB. Inkubasi cawan BSA, HE dan XLD selama
24  jam  pada  suhu  35°C  ±  1°C.  Amati  kemungkinan  adanya  koloni
Salmonella.
4)  Pengamatan Morfologi Salmonella
Pengamatan morfologi Salmonella dilakukan dengan mengambil 2 atau
lebih koloni  Salmonella  dari masing-masing media  Agar  selektif setelah
122
24  jam±  2  jam  inkubasi.  Koloni-koloni  Salmonella  yang  khas  (typical)
adalah sebagai berikut:
  Pada  Hectoen  Enteri  (HE)  Agar.  Koloni  hijau  kebiruan  sampai  biru
dengan  atau  tanpa  inti  hitam.  Umumnya  kultur
Salmonellamembentuk  koloni  besar,  inti  hitam  mengkilat  atau
hampir seluruh koloni terlihat berwarna hitam.
  Pada  XLD  Agar.  Koloni  merah  jambu  (pink)  dengan  atau  tanpa  inti
hitam.  Umumnya  kultur  Salmonellamembentuk  koloni  besar,  inti
hitam  mengkilat  atau  hampir  seluruh  koloni  terlihat  berwarna
hitam.
  Pada  Bismuth  Sulphite  Agar  (BSA).  Koloni  coklat,  abu-abu  atau
hitam;  kadang-kadang  metalik.  Biasanya  media  di  sekitar  koloni
pada  awalnya  berwarna  coklat,  kemudian  berubah  menjadi  hitam
(haloeffect) dengan makin lamanya waktu inkubasi.
Gambar  41. Kolonipositif pada media selektif
HE (atas), BSA (kiri), dan XLD (kanan) (gambar kanan) dan
koloni negatifpada media yang sama (gambar kiri)
Metode  lain  dalam  pengujian  adalah  dengan  uji  biokimiadan  uji
serologi.  Dalam  pengujian  ini  dibuat  kontrol  positif  yaitu  sampel
yang telah diberi biakan kultur Salmonellasebagai pembanding. Dari
123
pengkayaan  selektif,  biakan  dari  MKTTn  dan  RVS  diinokulasikan
pada  media  BGA  dan  XLD  untuk  tahap  inokulasi  dan  identifikasi.
Pada tahap ini hanya biakan dari BGA yang berasal dari MKTTn yang
menunjukkan  pertumbuhan  koloni.  Sedangkan  pada  media  XLD
tidak  ada  pertumbuhan  koloni.  Selanjutnya  koloni  dari  biakan  BGA
dilakukan  uji  identifikasi  yaitu  uji  biokimia  dan  uji  serologi.  Uji
biokimia yang dilakukan antar lain sebagai berikut :
a.  Uji TSIA (Triple Sugar Iron Agar)
Uji  Triple  Sugar  Iron  agar(TSIA)  merupakan  metode  yang
digunakan  untuk  melihat  kemampuan  mikroorganisme  dalam
memfermentasikan gula. Media yang diguanakan dalam uji TSIA
ini   adalah  TSIA  agar  yang  mengandung  3  macam  gula,  yaitu
glukosa  0,1%,  laktosa  0,1%,  dan  sukrosa  0,1%.  Selain  itu,  juga
terdapat   indicator  fenol  merah  yang  menyebabkan  perubahan
warna  dari  merah  orange  menjadi  kuning  dalam  suasana  asam.
TSIA  juga  mengandung  natrium  trisulfat,  yaitu  suatu  substrat
untuk penghasil  H
2
S, ferro sulfat menghasilkan  FeS (precipitat),
bewarna hitam untuk membedakan bakteri H
2
S dengan bakteribakteri  lainnya.Konsentrasi  glukosa  adalah  1/10  dari
konsentrasi  laktosa  atau  sukrosa  agar  fermentasi glukosa  saja
yang terlihat
Pada  uji  TSIA  warna  media  berubah  menjadi  merah  karena
bakteri  bersifat  basa  Perubahan  warna  media  ini  menandakan
bahwa  bakteri  ini  tidak  memfermentasi  laktosa  dan  sukrosa.
Pada  media  daerah  butt  media  berubah  berwarna  kuning  ini
menandakan bakteri memfermentasi glukosa. Pembentukan gas
positif  ini  hasil  dari  fermentasi  H
2
 dan  CO
2
 dapat  dilihat  dari
pecahnya  dan  terangkatnya  agar.  Pembentukan  H2S  positif
ditandai dengan adanya endapan berwarna hitam.
124
b.  Uji urease
Uji  urease  digunakan  untuk  mengetahui  kemampuan  mikroba
menghidrolisis  urea  menjadi  amonia.  Uji  ini  menggunakan
urease broth sebagai media diferensial yang dapat membedakan
bakteri  penghasil  eksoenzim  yaitu  enzim  yang  berfungsi  untuk
menghidrolisa urea menjadi ammonia. Kandungan urease broth
antara  lain  larutan  buffer,  urea,  nutrient,  serta  indicator  phenol
red.
Uji  urease  menunjukkan  hasil  positif  jika  terjadi  perubahan
warna  media  dari  kuning  menjadi  merah  keunguan  karena
amoniak  yang  dihasilkan  menyebabkan  lingkungan  menjadi
basa. Hasil uji urease negatif jika tidak terjadi perubahan warna
dari kuning menjadi merah keunguan.
c.  Uji Dekarboksilasi Lysin
Uji  Dekarboksilasi  Lysin  menggunakan  media  Xylose-Lysine-
Desoxycholate.  Agar  medium  digunakan  untuk  isolasi
Salmonelladanmemilah  organisme  lain  dengan  cara
memfermentasi  xylose, dekarboksilasi  lysine  dan produksi  H2S.
Fermentasi  xylose  sangat  lazim  bagi  kebanyakan  organisme
enterik  kecuali,  Shigella,  Providencia,Edwardsiella.  Pada  media
ini,  Salmonellaakan membentuk koloni merah dengan inti hitam,
sedang  Pseudomonas  dapat  tumbuh  dengan  warna  merah  dan
Eschericia  berwarna  kuning.  Mikroba  lain  yang  dapat  tumbuh
pada  media  ini  antara  lain  Arizona,  Proteus,  Aerobacter,
Klebsiella,Citrobacter.  Begitu  banyak  mikroba  yang  dapat
tumbuh,  sehingga  media  ini  kurang  dapat  memilah
Salmonellapada tahap awal. Sehingga lebih baik digunakan untuk
tahap konfirmasi kontaminan Salmonella. 
125
d.  Uji β-galaktosidase
Uji  β-galaktosidase  digunakan  utuk  identifikasi  beberapa  jenis
bakteri  seperti  Salmonella.  Enzim  β-galaktosidase  merupakan
enzim  yang  dapat  mengubah  laktosa  menjadi  glukosa  dan
galaktosa.  Beberapa  mikroorganisme  seperti  E.  coli,  dapat
menggunakan  laktosa  sebagai  sumber  karbon.  Selain  laktosa,
substrat alamiah dari enzim, adalah bahan yang sangat penting,
ONPG  (o-nitro-phenyl-β-D-galactopyranoside),  dapat  digunakan
pula.  Β-galaktosidase  dapat  mengkatalisis  ONPG  menjadi
galaktosa  dan  o-nitrofenol.  ONPG  tidak  berwarna  tetapi  setelah
hidrolisis  menjadi  o-nitrofenol,  akan  timbul  warna  kuning  pada
larutan  yang  alkali.  beberapa  jenis  bakteri  yang  mampu
melakukan  fermentasi  terhadap  karbohidrat  Streptococcus,
Lactobacillus,  Zygomonas,  Saccharomycetes,  Escherichia,
Enterobacter, Salmonella.
e.  Uji Indol
Uji  Indol  bertujuan  untuk  menentukan  kemampuan  bakteri
dalam  memecah  asam  amino  triptofan.  Media  ini  biasanya
digunakan  dalam  indentifikasi  yang  cepat.  Hasil  uji  indol  yang
diperoleh  negatif  karena  tidak  terbentuk  lapisan  (cincin)
berwarna merah muda pada permukaan biakan, artinya bakteri
ini  tidak  membentuk  indol  dari  tryptopan  sebagai  sumber
karbon,  yang  dapat  diketahui  dengan  menambahkan  larutan
kovacs.  Asam  amino  triptofan  merupakan  komponen  asam
amino  yang  lazim  terdapat  pada  protein,  sehingga  asam  amino
ini dengan mudah dapat digunakan oleh mikroorganisme akibat
penguraian protein.
126
f.  Uji Voges Proskauer
Uji  Voges  Proskauer  bertujuan  untuk  mengidentifikasi  jenis
bakteri  Untuk  membedakan  bakteri  Escherichia  coli  dengan
Enterobacteraerogenes.  Hasilnya  uji  ini  negatif,  karena  tidak
terbentuk  warna  merah  pada  medium  setelah  ditambahkan  anapthol  dan  KOH,  artinya  hasil  akhir  fermentasi  bakteri  ini
bukan asetil metil karbinol (asetolin).
Selain  uji  biokimia,  juga  terdapat  uji  serologi  untuk
mengidentifikasi  adanya  Salmonella  dalam  banhan  pangan.
Dalam  uji  serologi  tidak  terjadi  aglutinasi  pada  penambahan
antisera polivalen O, H, dan Vi . Jika hasil dari uji biokimia dan uji
serologi  contoh  atau  sampel  berbeda  dengan  hasil  kontrol
positif, maka  koloni yang tumbuh dari  biakan BGA pada  contoh
bukanlah  Salmonella,  sehingga  hasil  dari  pengujian  ini  dapat
dinyatakan  sebagai  negatif  koloni/25  gr.  Hasil  ini  telah
memenuhi  syarat  seperti  pada  SNI  01-4473-1998  yang
mensyaratkan  cemaran  Salmonellapada  mayonnaise  adalah
negatif koloni/25 gr.
Salmonellapositif jika pada uji biokimia yang dilakukan hasilnya
sebagai berikut:
  TSIA  :  butt  (+),  slant  (-),  gas  positif  atau  negatif  dan  H2S
positif atau negatif.
  Hidrolisis urea : negatif
  Dekarbosilasi lysine : positif
  Reaksi voges proskauer : negatif
  Produksi indol : negatif
  Uji  serologi:  terjadi  aglutinasi  pada  penambahan  antisera
polivalen O, H, dan Vi.
127
g.  Uji Biokimia Tambahan
Uji  biokimia  tambahan  dapat  dilakukan  jika  pada  biakan  masih
diragukan  adanya  Salmonella atau  tidak.  Tahapan  uji  biokimia
tambahan adalah sebagai berikut:
a)  Purple Lactose Broth
Pindahkan  1  ose  dari  TSI  Agar  miring  yang  telah  diinkubasi
selama  24  jam  – 48  jam  kedalam  phenol  red  lactose  atau
purple  Lactose  Broth.  Inkubasi  selama  48  jam  ±  2  jam  pada
suhu 35°C ± 1°C, tetapi amati setelah 24 jam.
Hasil  dinyatakan  positif  jika  terjadi  pembentukan  asam
(media  berubah  kuning)  dan  ditemukan  gas  pada  tabung
durham. Selain itu jika hanya terjadi pembentukan asam saja,
sudah  dapat  dinyatakan  positif.  Umumnya
Salmonellamemberikan  hasil  negatif  ditunjukkan  dengan
tidak  terbentuknya  gas  pada  tabung  durham  dan  warna
merah (phenol red  sebagai  indikator) atau ungu (bromcresol
purple sebagai indikator) pada seluruh media.
b)  Purple Sucrose Broth
Pindahkan  1  ose  dari  TSI  Agar  miring  yang  telah  diinkubasi
selama  24  jam  – 48  jam  kedalam  Phenol  red  sucrose  atau
purple  sucrose  Broth.  Inkubasi  selama  48  jam  ±  2  jam  pada
suhu 35°C ± 1°C, tetapi amati setelah 24 jam.
Positif, apabila  terjadi  pembentukan asam (kuning) dan gas
pada  tabung  durham.  Apabila  hanya  terjadi  pembentukan
asam,  maka  dapat  dinyatakan  positif.  Umumnya
Salmonellamemberikan  hasil  negatif,  ditunjukkan  dengan
tidak  terbentuknya  gas  pada  tabung  durham  dan  warna
128
merah (phenol red  sebagai  indikator) atau ungu (bromcresol
purple sebagai indikator) pada seluruh media.
c.  Medium MR-VP
Pindahkan  1  ose  dari  TSI  Agar  miring  ke  dalam  media  MR-VP  Broth  dan
inkubasikan selama 48 jam ± 2 jam pada suhu 35°C ± 1°C.
d.  Uji VP
Pindahkan 1 ml  MR-VP Broth  yang telah diinkubasi selama 48 jam ± 2 jam
pada  suhu  35°C  ±  1°C  ke  dalam  tabung  reaksi  steril  dan  inkubasikan
kembali MR-VP  Broth  selama 48 jam ± 2 jam pada suhu 35°C ± 1°C untuk
pengujian  Methyl  Red.  Tambahkan  0,6  ml  Alpha  Alphanaphtol  dan  kocok.
Tambahkan  0,2  ml  larutan  40%  KOH  dan  kocok  kembali.  Untuk
mempercepat reaksi tambahkan sedikit Kristal kreatin, dan amati hasilnya
setelah 4 jam. Perubahan warna menjadi merah muda  eosin  sampai merah
mirah  delima  (ruby)  pada  media  menunjukkan  reaksi  positif.Umumnya
Salmonella memberikan reaksi VP negatif.
e.  Uji MR
Tambahkan 5tetes - 6 tetes indikator  Methyl Red  kedalam media MR - VP
yang  telah  diinkubasi  selama  96  jam.  Amati  hasilnya  dengan  segera.
Umumnya  Salmonellamemberikan  reaksi  positif,  ditandai  dengan
terjadinya  difusi  warna  merah  pada  media.  Terjadinya  warna  kuning
menunjukkan reaksi negatif.
129
f.  Simmon Citrat Agar
Pindahkan 1  ose  dari TSI  Agar  miring kedalam media Simmon Citrate Agar
miring  dengan  cara  menggores  agar  miring  dan  menusuk  agar  tegak.
Inkubasikan selama 96 jam ± 2 jam pada suhu 35°C ± 1°C.
Hasil dinyatakan positif apabila terjadi pertumbuhan yang biasanya diikuti
dengan  perubahan  warnadari  hijau  menjadi  biru.  Umumnya  Salmonella
memberikan  hasil  citrate  positif.  Namun  jika  tidak  ada  atau  sedikit  sekali
pertumbuhan  dan  tidak  terjadi  perubahan  warna,  maka  hasil  dinyatakan
negatif.
3.  Tugas
Lembar Kerja 1
  Buatlah kelompok dalam kelas anda
  Carilah  informasi  atau  berita  tentang  keracunan  makanan  yang  terinfeksi
Salmonella(3 berita)
  Rangkumlah  dan  Analisis  informasi  atau  berita  tersebut  mengenai  factorfaktor yang menyebabkan keracunan ters
Dari hasil berbagai prosedur uji
Salmonella tersebut, lakukan salah
satu metode pada uji diatas.
Diskusikanlah hasilnya dengan
teman kelompok anda dan
presentasikan didalam kelas,
130
4.  Refleksi
Petunjuk
  Tuliskan nama dan KD yang telah anda selesaikan pada lembar tersebut!
  Tuliskan jawaban pertanyaan pada lembar refleksi
  Kumpulkan hasil refleksi pada guru anda
LEMBAR REFLEKSI
1.  Bagaimana kesan anda setelah mengikuti pembelajaran ini?
............................................................................ .......................................................................................
....................................................... ............................................................................................................
2.  Apakah anda telah menguasai seluruh materi pembelajaran ini? Jika ada
materi yang belum dikuasai tulis materi apa saja.
............................................................................................................................. ........................................
....................................................................... ..............................................................................................
3.  Manfaat apa yang anda peroleh setelah menyelesaikan pelajaran ini?
............................................................................................................................. ........................................
......................................................................................... ............................................................................
4.  Apa yang akan anda lakuan setelah menyelesaikan pelajaran ini?
..................................................................................................................... ................................................
........................................................................................................... ..........................................................
5.  Tuliskan secara ringkas apa yang telah anda pelajari pada kegiatan
pembelajaran ini!
............................................................................................................................. ........................................
................................................ ................................................................................................ .....................
131
Lembar kerja 1.
Tugas
Teknik Dilusi (Pengenceran)
Alat dan Bahan:
1.  Mikro pipet
2.  Pembakar Bunsen
3.  Tabung reaksi dan rak
5.  Latihan Pembelajaran
1.  Sebutkan ciri-ciri bakteri Salmonella
2.  Jelaskan berbagai macam media yang digunakan dalam identifikasi bakteri
Salmonella
3.  Jelaskan cara kerja identifikasi Salmonella!
4.  Bandingkan  cara  kerja  uji  identifikasi  Salmonella  pada  buku  teks.  Carilah
perbedaan dari masing-masing uji tersebut!
132
C.  Penilaian
1.  Penilaian Sikap
Indikator
Penilaian
Teknik  Bentuk
Instrumen
Butir Soal/Instrumen
Sikap
2.1
  Menampilkan
perilaku rasa
ingin tahu
dalam
melakukan
observasi
  Menampilkan
perilaku
obyektif
dalam
kegiatan
observasi
  Menampilkan
perilaku jujur
dalam
melaksanaka
n kegiatan
observasi
2.2 Mengom
promikan
hasil
observasi
kelompok
  Menampilkan
hasil kerja
kelompok
  Melaporkan
hasil diskusi
kelompok
Non Tes
Non Tes
Lembar
Observasi
Penilaian
sikap
Lembar
Observasi
Penilaian
sikap
1.  Rubrik Penilaian Sikap
No  Aspek
Penilaian
4  3  2  1
1  Menanya      
2  Mengamati      
3  Menalar      
4  Mengolah data      
5  Menyimpulkan       
6  Menyajikan      
Kriteria Terlampir
2.  Rubrik Penilaian Diskusi
No  Aspek
Penilaian
4  3  2  1
1  Terlibat penuh      
2  Bertanya      
3  Menjawab      
4  Memberikan
gagasan orisinil
5  Kerja sama       
6  Tertib 
133
Indikator
Penilaian
Teknik  Bentuk
Instrumen
Butir Soal/Instrumen
2.3
Menyumbang
pendapat
tentang cara uji
Salmonella
pada  bahan
pangan
Non Tes Lembar
Observasi
Penilaian
sikap
3.  Rubrik Penilaian Presentasi
No  Aspek
Penilaian
4  3  2  1
1  Kejelasan
Presentasi
2  Pengetahuan       
3  Penampilan     
Pengetahuan
1.  Ciri  dan
morfologi
Salmonella
2.  Prinsip  dan
konsep
identifikasi
Salmonella
3.  Barbagai
cara
identifikasi
salmonella
Tes Uraian 1.  Sebutkan ciri-ciri bakteri Salmonella
2.  Jelaskan berbagai macam media yang
digunakan dalam identifikasi bakteri
Salmonella
3.  Jelaskan cara kerja identifikasi
Salmonella!
4.  Bandingkan cara kerja uji identifikasi
Salmonella pada buku teks. Carilah
perbedaan dari masing-masing uji
tersebut
Keterampilan
1.  Melakukan
praktek
identifikasi
Salmonella
pada bahan
pangan
Non Tes
(Tes
Unjuk
Kerja)
3.  Rubrik Sikap Ilmiah
No  Aspek
Penilaian
4  3  2  1
1  Menanya      
2  Mengamati      
3  Menalar      
4  Mengolah data      
5  Menyimpulkan       
6  Menyajikan  
134
Indikator
Penilaian
Teknik  Bentuk
Instrumen
Butir Soal/Instrumen
4.  Rubrik Penilaian Prosedur pengolahan
Aspek
Penilaiaan
4  3  2  1
Cara melakukan
proses pengolahan
Cara menuliskan
data hasil
pengamatan
Kebersihan dan
penataan alat
135
Lampiran Rubrik &  Kriteria Penilaian :
a. Rubrik Sikap Ilmiah
Kriteria
1. Aspek menanya:
Skor 4   Jika pertanyaan yang diajukan  sesuai  dengan permasalahan
yang sedang dibahas
Skor 3  Jika  pertanyaan  yang  diajukan  cukup  sesuai  dengan
permasalahan yang sedang dibahas
Skor 2  Jika   pertanyaan  yang  diajukan  kurang   sesuai  dengan
permasalahan yang sedang dibahas
Skor 1  Tidak bertanya
2. Aspek mengamati :
Skor 4   Terlibat  dalam  pengamatan  dan  aktif  dalam  memberikan
pendapat
Skor 3  Terlibat dalam pengamatan
Skor 2  Berusaha terlibat dalam pengamatan
Skor 1  Diam tidak aktif
No  Aspek
Skor
4  3  2  1
1  Menanya      
2  Mengamati      
3  Menalar      
4  Mengolah data      
5  Menyimpulkan       
6  Menyajikan        
136
3. Aspek menalar
Skor 4   Jika nalarnya benar
Skor 3  Jika nalarnya hanya sebagian yang benar
Skor 2  Mencoba bernalar walau masih salah
Skor 1  Diam tidak bernalar
4. Aspek mengolah data :
Skor 4   Jika Hasil Pengolahan data benar semua
Skor 3  Jika hasil pengolahan data sebagian besar benar
Skor 2  Jika hasil pengolahan data sebagian kecil benar
Skor 1  Jika hasil pengolahan data salah semua
5. Aspek menyimpulkan :
Skor 4   jika kesimpulan yang dibuat seluruhnya benar
Skor 3  jika kesimpulan yang dibuat seluruhnya benar
Skor 2  kesimpulan yang dibuat sebagian kecil benar
Skor 1  Jika kesimpulan yang dibuat seluruhnya salah
6. Aspek menyajikan
Skor 4   jika   laporan  disajikan  secara   baik  dan  dapat  menjawabsemua
pertanyaan dengan benar
Skor 3  Jika laporan disajikan secara baik dan hanya dapat menjawab sebagian
pertanyaan
Skor 2  Jika  laporan  disajikan  secara  cukup  baik  dan  hanya  sebagian  kecil
pertanyaan yang dapat di jawab
Skor 1  Jika  laporan  disajikan  secara  kurang   baik  dan  tidak  dapat  menjawab
pertanyaan
137
b. Rubrik Penilaian Diskusi
Kriteria
1. Aspek Terlibat penuh :
Skor 4   Dalam  diskusi  kelompok  terlihat  aktif,  tanggung  jawab,
mempunyai pemikiran/ide, berani berpendapat
Skor 3   Dalam  diskusi  kelompok  terlihat  aktif,  dan  berani
berpendapat
Skor 2   Dalam diskusi kelompok kadang-kadang berpendapat
Skor 1   Diam sama sekali tidak terlibat
2. Aspek bertanya :
Skor 4   Memberikan  pertanyaan  dalam  kelompok  dengan  bahasa
yang jelas
Skor 3   Memberikan  pertanyaan  dalam  kelompok  dengan  bahasa
yang kurang jelas
Skor 2   Kadang-kadang memberikan pertanyaan
Skor 1   Diam sama sekali tdak bertanya
3. Aspek Menjawab :
Skor 4   Memberikan  jawaban  dari  pertanyaan  dalam  kelompok
dengan bahasa yang jelas
Skor 3   Memberikan  jawaban  dari  pertanyaan  dalam  kelompok
dengan bahasa yang kurang jelas
No  Aspek
Penilaian
4  3  2  1
1  Terlibat penuh      
2  Bertanya      
3  Menjawab      
4  Memberikan gagasan orisinil      
5  Kerja sama       
6  Tertib         
138
Skor 2   Kadang-kadang  memberikan  jawaban  dari  pertanyaan
kelompoknya
Skor 1   Diam tidak pernah menjawab pertanyaan
4. Aspek Memberikan gagasan orisinil :
Skor 4   Memberikan  gagasan/ide  yang  orisinil  berdasarkan
pemikiran sendiri
Skor 3   Memberikan gagasan/ide yang didapat dari buku bacaan
Skor 2   Kadang-kadang memberikan gagasan/ide
Skor 1   Diam tidak pernah memberikan gagasan
5. Aspek Kerjasama :
Skor 4   Dalam  diskusi  kelompok  terlibat  aktif,  tanggung  jawab
dalam  tugas,  dan  membuat  teman-temannya  nyaman
dengan keberadaannya
Skor 3   Dalam  diskusi  kelompok  terlibat  aktif  tapi  kadang-kadang
membuat  teman-temannya  kurang  nyaman  dengan
keberadaannya
Skor 2   Dalam diskusi kelompok kurang terlibat aktif
Skor 1   Diam tidak aktif
6. Aspek Tertib :
Skor 4   Dalam diskusi kelompok aktif, santun, sabar mendengarkan
pendapat teman-temannya
Skor 3   Dalam diskusi kelompok tampak aktif,tapi kurang santun
Skor 2   Dalam diskusi kelompok suka menyela pendapat orang lain
Skor 1   Selama  terjadi  diskusi  sibuk  sendiri  dengan  cara  berjalan
kesana kemari
139
c. Rublik Penilaian Penggunaan Alat / bahan
Aspek
Skor
4  3  2  1
Cara merangkai alat      
Cara menuliskan data hasil
pengamatan
Kebersihan dan penataan alat    
Kritera :
1. Cara merangkai alat :
Skor 4 : jika seluruh peralatan dirangkai sesuai dengan prosedur
Skor 3 : jika sebagian besar peralatan dirangkai sesuai dengan prosedur
Skor 2 : jika sebagian kecil peralatan dirangkai sesuai dengan prosedur
Skor 1 : jika peralatan tidak dirangkai sesuai dengan prosedur
2. Cara menuliskan data hasil pengamatan :
Skor 4 :   jika  seluruh  data  hasil  pengamatan  dapat  dituliskan  dengan
benar
Skor 3:   jika  sebagian  besar  data  hasil  pengamatan  dapat  dituliskan
dengan benar
Skor 2:   jika   sebagian  kecil  data  hasil  pengamatan  dapat  dituliskan
dengan benar
Skor 1 :   jika  tidak ada  data  hasil  pengamatan yang dapat dituliskan
dengan benar
3. Kebersihan dan penataan alat :
Skor 4 :   jika  seluruh  alat  dibersihkan  dan  ditata  kembali  dengan
benar
Skor 3:   jika  sebagian  besar  alat  dibersihkan  dan  ditata  kembali
dengan benar
Skor 2 :   jika   sebagian  kecil  alat  dibersihkan  dan  ditata  kembali
dengan benar
140
Skor 1 :   jika   tidak  ada  hasil  alat  dibersihkan  dan  ditata  kembali
dengan benar
d. Rubrik Presentasi
Kriteria
1. Kejelasan presentasi
Skor 4   Sistematika  penjelasan  logis  dengan   bahasa  dan  suara  yang
sangat jelas
Skor 3  Sistematika penjelasan logis dan bahasa sangat jelas tetapi suara
kurang jelas
Skor 2  Sistematika penjelasan tidak logis meskipun menggunakan bahasa
dan suara cukup jelas
Skor 1  Sistematika penjelasan tidak logis meskipun menggunakan bahasa
dan suara cukup jelas
2. Pengetahuan
Skor 4   Menguasai  materi  presentasi  dan  dapat  menjawab  pertanyaan
dengan baik dan kesimpulan mendukung topik yang dibahas
Skor 3  Menguasai  materi  presentasi  dan  dapat  menjawab  pertanyaan
dengan baik dan kesimpulan mendukung topik yang dibahas
Skor 2  Penguasaan  materi  kurang  meskipun  bisa  menjawab  seluruh
pertanyaan  dan  kesimpulan  tidak  berhubungan  dengan  topik
No  Aspek
Penilaian
4  3  2  1
1  Kejelasan Presentasi      
2  Pengetahuan       
3  Penampilan         
141
yang dibahas
Skor 1  Materi  kurang  dikuasai  serta  tidak  bisa  menjawab  seluruh
pertanyaan dan kesimpulan tidak mendukung topik
3. Penampilan
Skor 4   Penampilan menarik, sopan dan rapi, dengan penuh percaya diri
serta menggunakan alat bantu
Skor 3  Penampilan  cukup  menarik,  sopan,  rapih  dan  percaya  diri
menggunakan alat bantu
Skor 2  Penampilan  kurang  menarik,  sopan,  rapi  tetapi  kurang  percaya
diri serta menggunakan alat bantu
Skor 1  Penampilan kurang menarik, sopan, rapi tetapi tidak percaya diri
dan tidak menggunakan alat bantu
142
Penilaian Laporan Observasi
No  Aspek
Skor
4  3  2  1
1
Sistematika
Laporan
Sistematika
laporan
mengandung
tujuan,
masalah,
hipotesis,
prosedur, hasil
pengamatan
dan
kesimpulan.
Sistematika
laporan
mengandung
tujuan,  ,
masalah,
hipotesis
prosedur, hasil
pengamatan
dan
kesimpulan
Sistematika
laporan
mengandung
tujuan,
masalah,
prosedur  hasil
pengamatan
dan
kesimpulan
Sistematika
laporam hanya
mengandung
tujuan,  hasil
pengamatan
dan
kesimpulan
2
Data
Pengamatan
Data
pengamatan
ditampilkan
dalam  bentuk
table,  grafik
dan  gambar
yang  disertai
dengan
bagian-bagian
dari  gambar
yang lengka[
Data
pengamatan
ditampilkan
dalam  bentuk
table,  gambar
yang  disertai
dengan
beberapa
bagian-bagian
dari gambar
Data
pengamatan
ditampilkan
dalam  bentuk
table,  gambar
yang  disertai
dengan  bagian
yang  tidak
lengkap
Data
pengamatan
ditampilkan
dalam  bentuk
gambar  yang
tidak  disertai
dengan
bagian-bagian
dari gambar
3
Analisis  dan
kesimpulan
Analisis  dan
kesimpulan
tepat  dan
relevan
dengan   datadata  hasil
pengamatan
Analisis  dan
kesimpulan
dikembangkan
berdasarkan
data-data  hasil
pengamatan
Analisis  dan
kesimpulan
dikembangkan
berdasarkan
data-data  hasil
pengamatan
tetapi  tidak
relevan
Analisis  dan
kesimpulan
tidak
dikembangkan
berdasarkan
data-data  hasil
pengamatan
4
Kerapihan
Laporan
Laporan
ditulis  sangat
rapih,  mudah
dibaca  dan
disertai
dengan  data
kelompok
Laporan
ditulis  rapih,
mudah  dibaca
dan  tidak
disertai
dengan  data
kelompok
Laporan
ditulis  rapih,
susah  dibaca
dan  tidak
disertai
dengan  data
kelompok
Laporan
ditulis  tidak
rapih,  sukar
dibaca  dan
disertai
dengan  data
kelompok
143
DAFTAR PUSTAKA
BadanPOMRI.2008.PengujianMikrobiologiPangan.InfoPOMvol.9no.2 Maret 2008.
Buckle, K. A., dkk. 1987. Ilmu Pangan.Diterjemahkanoleh Adiono dan Hari Purnomo.
UI Press, Jakarta.
E.   Pradhika.   2008.   Menentukan   Jumlah   dan   Ukuran   Mikroba.   http:   //ekmon-
saurus.blogspot.com.diakses tanggal5 Februari 2011
Fardiaz,  S.,.1992.  Analisis  Mikrobiologi  Pangan,  Departemen  Pendidikan  dan
Kebudayaan, IPB
Fardiaz, S. 1993. Analisis Mikrobiologi Pangan.PT. Raja Grafindo Persada., Jakarta.
Ratna  Siri  Hadiortomo.  1985.  Mikrobiologi  Dasar  dalam  Praktek.  Labolatorium
Mikrobiologi. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. IPB. Bogor.
Setiawan,W.2005.PenghitunganJumlahMikrobaSecaraLangsungMenggunakan
Haemocytometer.  http://blog.unila.ac.id/wasetiawan.Diaksestanggal  5
November 2013
Standar  Nasional  Indonesia.  2006.  Air  Minum  dalam  Kemasan.  SNI  01-3553-2006.
BadanStandarisasiNasional.
Standar  Nasional  Indonesia.  2006.  Tahapan  Uji  Salmonella.  SNI  SN-01-2332.2-2006.
BadanStandarisasiNasional.
Sumarsih,  Sri.  2003.   Diktat  Kuliah  Mikrobiologi  Dasar.  Fakultas  Pertanian  UP N
“Veteran”.Jogjakarta
Pelczar, Michael J, Jr. dan E.C.S. Chan. 2007. Dasar-Dasar Mikrobiologi. UI Press. Jakarta
Pramono, Hendro. 2007.  Catatan  Kuliah  Mikrobiologi  Dasar.
www.unsoed.ac.id.Diakses tanggal 5 November 2013
Rachdie. 2008. Faktor yang Mempengaruhi Pertumbuhan Mikroba. http://rachdie
Sugianto,  Tantri.  2012. Uji  Salmonella.  Diakses  di  :http://tantrisugianto.blogspot.com/2012/07/uji-salmonella.html.  Diakses  pada  :  Minggu,
18 Oktober
Pelczar, M. J & E. C. S Chan. 1986.Dasar-dasar Mikrobiologi.UI-Press, Jakarta.
Widianti,NiLuhPdanNiPutuRistiati.2004.AnalisisKualitatifBakteriKoliformpada
DepoAirMinumIsiUlangdiKotaSingarajaBali.JurnalEkologiKesehatanVol.3no. 1.
Winarno, FG. Keamanan Pangan> Institut pertanian Bogor.
Diunduh dari BSE.Mahoni.com